Modeli ya panya ya sindromu ya ovari yenye vifuko vingi iliyoundwa kwa letrozole + lishe yenye mafuta mengi, ni modeli ya wanyama ya kabla ya kliniki inayounganisha katika mfumo mmoja wa majaribio matatizo ya uzazi yanayofanana na PCOS yanayosababishwa na letrozole pamoja na msongo wa kimetaboliki wa lishe yenye mafuta mengi. Katika utafiti, panya 24 jike wa Sprague-Dawley waligawanywa katika makundi matatu: kundi la udhibiti (CON), kundi lililopewa letrozole chini ya lishe ya kawaida (LV), na kundi lililopewa lishe yenye mafuta mengi pamoja na letrozole (HLV). Watafiti walitathmini kwa pamoja uzito wa mwili, ustahimilivu wa glukosi, glukosi ya kufunga, lipidi za seramu, histolojia ya ini, tishu ya mafuta ya ndani ya tumbo, kongosho, ovari na uterasi; immunofluorescence ya kongosho na ovari, pamoja na ekspresheni ya jeni katika tishu za kimetaboliki.

Hitimisho kuu la utafiti ni kwamba lishe yenye mafuta mengi haikuzidisha kwa kiwango sawamatatizo yotekatika modeli ya letrozole; badala yake, ilizidisha kwa kuchagua sifa fulani za kimetaboliki na histopatholojia. Katika kundi la HLV, ikilinganishwa na LV, kulikuwa na steatosis ya ini iliyoonekana zaidi, adipocytes za visceral kubwa zaidi, ekspresheni ya juu ya PEPCK na G6Pase ya ini, ekspresheni ya juu ya SREBP-1c na ACC katika tishu ya mafuta, na mabadiliko yaliyoonekana zaidi ya CYP19A1 na AMH katika ovari. Kinyume chake, hakuna kuzorota kwa ziada kuliko muhimu kulikoonyeshwa kati ya LV na HLV katika uzito wa mwili, glukosi ya damu ya kufunga, lipidi za seramu, ishara ya immunofluorescence ya insulini ya kongosho, TUNEL positivity ya kongosho, na jeni nyingi za msingi za uashiriaji wa insulini.

Tofauti hii ni muhimu sana. Utafiti hauungi mkono hitimisho kwamba “lishe yenye mafuta mengi huzidisha zaidi kila kiashiria cha kimetaboliki na uzazi katika PCOS”. Kauli iliyo sahihi zaidi ni kwamba, katika mazingira yanayofanana na PCOS yaliyotengenezwa kwa letrozole, lishe yenye mafuta mengiilizidisha kwa kuchagua baadhi ya viashiria vya uzalishaji wa glukosi, lipogenesis, hypertrophy ya tishu ya mafuta, histopatholojia ya ini na ovari.

Utafiti huu si utafiti wa matibabu kwa binadamu. Insulini ya seramu, viwango vya androgen vinavyozunguka na HOMA-IR havikupimwa moja kwa moja. Kwa hiyo, mnyororo wa kimekanizimu kutoka compensatory hyperinsulinemia hadi hyperandrogenism haujathibitishwa moja kwa moja na jaribio hili. Zaidi ya hayo, mzunguko wa estrus, fiziolojia ya ovari na usambazaji wa mafuta kwa panya hutofautiana na binadamu. Matokeo yanatoa modeli ya kabla ya kliniki ya kuchunguza mhimili wa kimetaboliki-uzazi wa PCOS; hayamaanishi ufanisi wa moja kwa moja wa matibabu ya kliniki au kwamba athari zilezile zitatokea kwa binadamu.

Tatizo kuu la utafiti ni nini?

Letrozole ni kiwanja kinachozuia enzimu aromatase. Aromatase ni mfumo wa kimeng’enya unaohusika na ubadilishaji wa androgen kuwa estrogen, na protini ya aromatase inayokodishwa na CYP19A1 iko katikati ya ubadilishaji huu. Modeli za panya zinazotumia letrozole zinaweza kuunda sifa muhimu za uzazi za PCOS kama ziada ya androgen na kuvurugika kwa ovulation. Hata hivyo, hoja ya kuanzia ya watafiti ni kwamba modeli zinazotumia letrozole pekee huenda zisiwakilishe vya kutosha matatizo yote ya kimetaboliki au ukali wake unaoonekana katika PCOS inayohusiana na unene kupita kiasi.

Kwa hiyo, utafiti ulilenga kuunda fenotipu pana zaidi inayofanana na PCOS kwa kuongeza msongo wa kimetaboliki wa lishe yenye mafuta mengi kwenye msongo wa endocrine/uzazi unaosababishwa na letrozole. Swali kuu la majaribio hapa si tu “PCOS ilitokea?” Swali muhimu zaidi ni,ni viungo, molekuli na viashiria gani vya histolojia vinavyozidi kuvurugika lishe yenye mafuta mengi inapoongezwa kwenye msingi wa letrozole.

Modeli ya Letrozole + Lishe yenye Mafuta Mengi Inawakilisha Nini?

Modeli ya letrozole + lishe yenye mafuta mengi ni modeli ya majaribio ya kabla ya kliniki inayotumika kuchunguza mahusiano ya kimetaboliki-uzazi kati ya ini, tishu ya mafuta ya visceral, kongosho na ovari kwa kuunganisha katika panya mmoja matatizo ya uzazi/endocrine yanayofanana na PCOS yanayosababishwa na letrozole na mzigo wa kimetaboliki unaosababishwa na lishe yenye mafuta mengi; modeli hii si nakala halisi ya PCOS ya binadamu wala modeli ya utambuzi wa kliniki.

Kwa nini makundi matatu yanahitajika?

Ulinganisho muhimu zaidi katika muundo huuni kati ya LV na HLV. Tofauti kubwa kati ya CON na HLV peke yake haimaanishi kwamba “lishe yenye mafuta mengi ilisababisha mabadiliko haya”; kwa sababu kundi la HLV lina letrozole pamoja na lishe yenye mafuta mengi. Ili kuona athari ya ziada ya lishe yenye mafuta mengi juu ya letrozole, ni lazima kuangaliwa kama HLV ni tofauti na LV.

Lishe yenye mafuta mengi inamaanisha nini hasa?

Katika lishe ya D12492 iliyopewa kundi la HLV,%60 ya nishati ilitoka kwenye mafuta, %20 kwenye wanga na %20 kwenye protini. Msongamano wa jumla wa nishati wa lishe ulitolewa kuwa 5,24 kcal/g. Kauli “%60 kcal mafuta” haimaanishi kwamba %60 ya uzito wa chakula ni mafuta; inamaanisha kwamba %60 ya nishati yote ya kimetaboliki inatoka kwenye vyanzo vya mafuta. Chanzo hakiripoti kwa kiwango sawa cha undani muundo wa macronutrient wa lishe ya kawaida iliyotolewa kwa makundi ya CON na LV.

Kwa nini uashiriaji wa insulini uko katikati?

Insulini inapofika kwenye seli, mwitikio wa kimetaboliki hautegemei molekuli moja pekee. Mhimili mkuu unaofuatiliwa katika utafiti niINSR → IRS → PI3K → AKTmnyororo wa uashiriaji. INSR ni kipokezi cha insulini. IRS-1 na IRS-2 ni jeni za protini adaptor zinazosafirisha ishara kutoka kwenye kipokezi kwenda ndani ya seli. PI3K na AKT ni hatua kuu za kati zinazohusika katika kupeleka ishara kwenye mwitikio wa kimetaboliki. GLUT4 inahusishwa hasa na usafirishaji wa glukosi kuingia kwenye seli katika tishu zinazoitikia insulini.

Hata hivyo, ni muhimu kukumbuka kwamba thamani zilizopimwa kwa qPCR katika utafiti huu kimsingi niekspresheni ya mRNA. Kupungua kwa kiasi cha mRNA ya jeni kunaweza kuendana na kuvurugika kwa njia husika ya uashiriaji, lakini hakupimi moja kwa moja kiasi cha protini, hali ya phosphorylation au shughuli ya enzimu. Watafiti pia wanaeleza kuwa uthibitishaji wa ziada kwa kutumia viashiria maalumu vya phosphorylation kama p-AKT na p-INSR unahitajika.

Kuna pia jambo la kuzingatia kwa ini. Kisafirishaji kikuu cha glukosi cha pande mbili katika hepatocytes ni GLUT2. Chanzo kinaeleza mahsusi kwamba kupungua kwa GLUT4 mRNA kunakoonekana kwenye ini kunaweza kuakisi ekspresheni ya kiwango cha chini katika hepatocytes au mchango wa seli zisizo parenchymal za ini. Kwa hiyo, matokeo ya GLUT4 ya ini hayapaswi kutafsiriwa kama “kisafirishaji kikuu cha glukosi katika hepatocytes ni GLUT4 na kimezimwa moja kwa moja”.

Gluconeogenesis, lipogenesis na oxidation ya asidi za mafuta vinamaanisha nini?

PEPCKnaG6Pase, ni jeni mbili muhimu zinazohusishwa na gluconeogenesis, mchakato wa ini wa kutengeneza glukosi mpya. Kuongezeka kwa ekspresheni ya jeni hizi, katika tafsiri ya utafiti wa chanzo, kunaendana na mabadiliko ya kimetaboliki kuelekea kuongezeka kwa uzalishaji wa glukosi wa ndani.

SREBP-1c,FASnaACCni vidhibiti vinavyohusiana na usanisi wa mafuta/lipogenesis. SREBP-1c hushiriki katika udhibiti wa programu ya jeni za lipogenic; ACC hudhibiti hatua mojawapo ya awali ya usanisi wa asidi za mafuta; FAS huwakilisha kompleksi ya usanisi wa asidi za mafuta. Jedwali la primers na Figure 6 la chanzo hutumia “FAS”, ilhali katika maandishi ya majadiliano wakati mwingine huonekana “FASN”; hapa FAS imetumika kwa kuhifadhi jina lililo katika jedwali na grafu za chanzo.

CPT1anaACOX1ni jeni zinazohusiana na matumizi ya oxidative ya asidi za mafuta. Kuwa kwa zote mbili chini ya udhibiti katika makundi ya LV na HLV kunaendana na mabadiliko upande wa oxidation ya asidi za mafuta; hata hivyo, hakuna tofauti ya ziada iliyo muhimu kati ya LV na HLV iliyoripotiwa.

Ni miundo gani ilitathminiwa katika ovari?

Corpus luteum, ni muundo muhimu wa histolojia unaoundwa kwa mabadiliko ya follicle baada ya ovulation na unaonyesha kuwa mzunguko wa uzazi unafanya kazi. Kupungua kwa idadi ya corpus luteum kunaendana na kuvurugika kwa mzunguko wa kawaida wa ovulation.

Follicle ya antral, ni follicle iliyofikia hatua ya juu zaidi ya maendeleo na yenye antrum iliyojaa maji.Follicles za cysticzinamaanisha miundo iliyopanuka na iliyokengeuka kutoka kwenye maendeleo ya kawaida ya follicle.Follicle ya atreticni follicle isiyoweza kuendelea kukua na kuingia katika degeneration. Katika utafiti, idadi ya corpus luteum na follicles za antral ilipungua katika makundi ya LV na HLV huku follicles za cystic zikiongezeka; idadi ya follicles za atretic ilikuwa juu zaidi katika HLV kuliko LV.

CYP19A1 na AMH zinaonyesha nini?

CYP19A1, ni kiashiria kikuu kinachohusiana na jina la jeni/protini la enzimu aromatase.AMH, anti-Müllerian hormone, ni kiashiria kinachohusiana na mazingira ya follicle ya ovari na maendeleo ya follicle. Katika utafiti, viashiria vyote viwili vilitathminiwa kwa immunofluorescence na mabadiliko makubwa zaidi yalionekana katika HLV kuliko LV.

Kuna kikomo muhimu cha kipimo hapa: kuongezeka kwa ishara ya fluorescence ya CYP19A1 si ushahidi wa moja kwa moja kwamba shughuli ya enzimu aromatase au uzalishaji wa estrogen umeongezeka. Letrozole tayari huzuia aromatase kifamasia, na viwango vya androgen/estrogen vinavyozunguka havikupimwa moja kwa moja katika utafiti huu. Vivyo hivyo, mabadiliko katika fluorescence ya AMH peke yake hayatoi kipimo kinachoeleza kazi yote ya ovari.

Nini kilipimwa katika kongosho?

Katika visiwa vya kongosho, immunofluorescence ya insulini na rangi ya TUNEL zilitumika. Kupungua kwa ishara ya insulini huonyesha mabadiliko katika eneo/ishara ya seli zenye insulini katika muundo wa islet, huku kipimo cha TUNEL kikijaribu kutambua ishara ya nyuklia ya apoptosis inayolingana na kugawanyika kwa DNA.

Uchambuzi wa TUNEL ulitathmini nuclei zenye DAPI ndani ya ROI iliyofafanuliwa kwa islet ya kongosho. Kwa hiyo, matokeo ya TUNEL si “kiasi cha insulini inayozunguka” wala “kongosho hutoa insulini kiasi gani”. Zaidi ya hayo, kwa kuwa rangi ya TUNEL peke yake haionyeshi kwamba kila nucleus iliyotambuliwa mara mbili pamoja na insulini lazima iwe β-cell, ni salama zaidi kusoma matokeo kamaishara ya apoptosis katika eneo la islet.

Matokeo yanayoungwa mkono moja kwa moja na yasiyoungwa mkono na utafiti

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

Muundo wa kina wa jaribio la wanyama

Utafiti ulitumia panya jike wa Sprague-Dawley wenye umri wa wiki saba. Baada ya kununuliwa, wanyama walipewa wiki moja ya kuzoea mazingira; kisha waligawanywa bila upendeleo katika makundi matatu yenye wanyama wanane kila moja. Hivyo, jumla ya sampuli ilikuwa panya 24.

Mazingira ya makazi yalikuwa joto la 23±2 °C, unyevunyevu wa jamaa wa %50±10 na mzunguko wa saa 12 mwanga/saa 12 giza. Wanyama walikuwa na ufikiaji huru wa chakula na maji.

Kundi la CON lilipewa maji yaliyodistiliwa kwa mdomo mara moja kwa siku kwa wiki saba. Makundi ya LV na HLV yalipewa letrozole kwa kipimo cha 1 mg/kg, ikiwa imesimamishwa katika %1 carboxymethylcellulose, kwa mdomo mara moja kwa siku kwa wiki saba. Kundi la HLV lilitumia pia lishe yenye mafuta mengi yenye nambari D12492 katika kipindi hicho. Chanzo hakiripoti mgawanyo wa kina wa nishati wa lishe ya kawaida.

Mwishoni mwa jaribio, mkusanyiko wa CO₂uliongezwa hatua kwa hatua hadi %30; baada ya kupoteza fahamu damu ilichukuliwa kwa cardiac puncture na euthanasia ikakamilishwa kwa cervical dislocation. Ovari, uterasi, ini, kongosho na tishu ya mafuta ya visceral zilikusanywa. Kwa kutenganisha seramu, damu ilicentrifuge kwa 12.000 × g kwa dakika 15 na seramu kuhifadhiwa katika −80 °C.

Uzito wa mwili ulirekodiwa kila wiki. Grafu ya uzito wa mwili katika makala inaendelea hadi wiki ya 8; mbinu inaeleza matumizi ya wiki saba baada ya wiki moja ya kuzoea mazingira. Kwa hiyo grafu inaonekana kujumuisha ratiba ya jumla ya kuzoea + matumizi, ingawa chanzo hakijaweka lebo ya wiki ya kuzoea kwenye grafu.

Kipimo cha uvumilivu wa glukosi kwa mdomo kilifanywaje?

Kipimo cha uvumilivu wa glukosi kwa mdomo (OGTT) ni kipimo cha nguvu kinachochunguza jinsi mwili unavyoweza kudhibiti mzigo wa glukosi kwa muda. Baada ya panya kufunga kwa saa 12, walipewa 2 g/kg D-glucose kwa mdomo; glukosi ya damu kutoka kwenye vena ya mkia ilipimwa katika dakika 0, 30, 60, 90 na 120. Glukosi ya kufunga kabla ya necropsy pia ilipimwa kwa glucometer inayobebeka baada ya kufunga kwa saa 12.

Biokemia ya seramu

AST, ALT, triglyceride (TG), cholesterol jumla (TC) na HDL-cholesterol zilipimwa kwa kits za kibiashara za Fujifilm; LDL-cholesterol ilihesabiwa kulingana na maelekezo ya mtengenezaji. Absorbance ilisomwa kwa kifaa cha DRI-CHEM NX500. Ingawa AST na ALT zimo miongoni mwa vigezo vilivyopimwa katika sehemu ya mbinu, makala ya chanzo haitoi matokeo tofauti ya nambari kwao katika simulizi kuu la matokeo; kwa hiyo hakuna thamani iliyobuniwa hapa.

Histolojia ilifanywaje?

Ini, kongosho, tishu ya mafuta ya visceral, ovari na uterasi zilifiksishwa katika %10 neutral buffered formalin, zikawekwa kwenye parafini na kukatwa vipande vya 4 µm kwa HM325 Micro-Tome. Vipande vitatu kwa kila tishu kutoka kwa kila mnyama vilichunguzwa. Vipande vilipakwa hematoxylin-eosin (H&E) na kutathminiwa kwa darubini ya mwanga Nikon Eclipse Ci-L Plus.

Katika vipande vya ovari, corpus luteum, follicles za cystic na follicles za atretic zilitathminiwa na vipimo husika vya morphometry vilifanywa. Katika tishu ya mafuta ya visceral, kipenyo cha adipocyte kilipimwa kwa ukuzaji wa ×200.

Alama ya uharibifu wa ini iliundwaje?

Chanzo kilitumia mbinu ya shughuli ya NAFLD inayotegemea Kleiner kwa istilahi ya sasa ya MASLD na kujumlisha vipengele vinne vya histolojia. Kwa utafiti huu, alama ya jumla ilikuwa katika kiwango cha 0–12.

Onyo la utoaji taarifa ndani ya chanzo:Katika mbinu ya takwimu, alama hii ya ordinal inaelezwa kuwasilishwa kama median na interquartile range (IQR); maelezo ya Figure 3 pia yanafafanua box plot kama median na IQR. Kinyume chake, maandishi ya matokeo yanaandika alama za CON, LV na HLV kama 2,60±1,58; 4,60±1,53 na 6,67±0,52 kwa kutumia “±”. Kwa kuwa chanzo hakielezi tofauti hii ya uwasilishaji, thamani hizi hazijawekewa upya lebo ya mean±SD hapa.

Mbinu ya immunofluorescence

Tishu za kongosho na ovari zilizowekwa kwenye parafini ziliincubate na antibodies za insulin, AMH na CYP19A1 katika dilution ya 1:500; kisha secondary antibodies zenye Alexa Fluor 488/594 zilitumika katika dilution ya 1:1.000. Nuclei zilionyeshwa kwa mounting medium yenye DAPI. Picha zilipigwa kwa EVOS M5000 Imaging System chini ya hali zilezile za exposure na baada ya kuondoa background kwa ImageJ, fluorescence intensity ilichambuliwa.

ROI (region of interest), ni eneo lililowekewa mipaka kwenye picha ambako uchambuzi wa kiasi utafanywa. Visiwa vya kongosho vilifafanuliwa kwa mkono kama ROI na hali zilezile za exposure zilidumishwa katika picha tofauti. Hii inalenga kupunguza athari ya bandia ya mabadiliko ya kamera/exposure wakati wa kulinganisha fluorescence intensity kati ya makundi.

Kipimo cha TUNEL na fomula iliyotumika

Kipimo cha TUNEL ni mbinu inayotumika kutambua seli za apoptotic kwa kuweka alama kwenye ishara ya nyuklia inayohusiana na kugawanyika kwa DNA. DeadEnd Fluorometric TUNEL System ilitumika katika chanzo. Vipande vilideparaffinize kwa xylene, vikashughulikiwa na 20 µg/ml proteinase K kwa 37 °C kwa dakika 20 na kuincubate na detection mixture kwa 37 °C gizani kwa dakika 60.

Hesabu ya asilimia iliyotumika katika chanzo:

\[ \text{TUNEL-pozitif hücre (\%)}= \frac{\text{TUNEL-pozitif DAPI çekirdek sayısı}} {\text{adacık ROI içindeki toplam DAPI-pozitif çekirdek sayısı}} \times 100 \]

Numerator ni idadi ya nuclei zinazozidi threshold ya TUNEL. Denominator ni jumla ya nuclei DAPI-positive ndani ya ROI ya islet ileile ya kongosho. Matokeo ni asilimia. Threshold ileile ilitumika kwa picha zote zilizopigwa chini ya hali zilezile za exposure. Maeneo ya islet yasiyopishana yalitathminiwa kwa kila mnyama na wastani wa asilimia ulitumika kama thamani wakilishi ya mnyama.

Mbinu ya qPCR

RNA yote ilitolewa kutoka ini na tishu ya mafuta ya visceral. Kwa kila sampuli, 50 mg ya tishu ilihomogenize kwenye 1 ml Easy Blue Reagent juu ya barafu na ikacentrifuge kwa 12.000 × g kwa dakika 15 katika 4 °C. Kutoka kila sampuli, 5 µg RNA ilibadilishwa kuwa cDNA kwa Prime Script RT Reagent Kit, na quantitative PCR ilifanywa kwa TB Green PCR Master Mix. β-actin ilitumika kama jeni ya udhibiti/rejea ya ndani, na kundi la CON likakubaliwa kama calibrator.

2^−ΔΔCqMbinu Hii Huhesabu Nini?

2^−ΔΔCqmbinu huhesabu kiwango cha jamaa cha mRNA katika sampuli kwa kunormalize ekspresheni ya jeni lengwa kwanza kwa jeni ya rejea na kisha kwa kundi la udhibiti katika qPCR; katika utafiti huu jeni ya rejea ni β-actin, calibrator ni kundi la CON, na matokeo si idadi kamili ya molekuli za mRNA bali ekspresheni ya jamaa dhidi ya udhibiti.

Mpangilio wa kihisabati wa mbinu ni huu:

\[ \Delta C_q=C_{q,\text{hedef gen}}-C_{q,\beta\text{-aktin}} \]

Katika hatua ya kwanza, tofauti ya Cq kati ya jeni lengwa na β-actin huchukuliwa. Kwa njia hii, sehemu ya tofauti za kiufundi kati ya sampuli, kama kiasi cha nyenzo ya awali, hunormalizwa dhidi ya jeni ya rejea.

\[ \Delta\Delta C_q=\Delta C_{q,\text{örnek}}-\Delta C_{q,\text{CON}} \]

Katika hatua ya pili, thamani iliyowekwa kawaida ya sampuli ya majaribio hulinganishwa na thamani iliyowekwa kawaida ya kundi la udhibiti.

\[ \text{Göreli ekspresyon}=2^{-\Delta\Delta C_q} \]

Hatua ya mwisho hutoa mabadiliko ya jamaa ya fold. Kwa hiyo, thamani ya kundi la udhibiti inatarajiwa kuwa takriban 1. Kwa mfano, thamani ya jamaa ya takriban 0,5 ina maana, chini ya mawazo ya mbinu, kwamba mRNA lengwa iko karibu nusu ya kiwango cha udhibiti; takriban 2 ina maana karibu mara mbili ya kiwango cha udhibiti. Thamani hizi si sawa na kiasi cha protini au shughuli ya protini.

Chanzo kinatoa mfuatano wa primers kwa undani. Ingawa orodha ya jeni lengwa katika maelezo ya mbinu ya qPCR haitaji wazi TNF, IL-1β na IL-18, jeni hizi tatu zipo katika jedwali la primers la chanzo na matokeo yao yanaripotiwa katika Figure 6D. Kwa hiyo, jeni za uvimbe zinachukuliwa kuwa kweli zilipimwa katika chanzo, lakini upungufu huu wa kutaja katika aya ya mbinu unapaswa pia kubainishwa.

Uchambuzi wa takwimu ulifanywaje?

Uchambuzi ulifanywa kwa GraphPad Prism 9.0. Matokeo mengi ya kiasi yaliripotiwa kama mean ± standard deviation. Katika ulinganisho wa makundi matatu kwa wakati mmoja, one-way ANOVA ilitumika, ikifuatiwa na Tukey post hoc test kwa ulinganisho wote wa jozi.

Kwa data kama uzito wa mwili na OGTT ambapo mnyama yuleyule alipimwa mara kwa mara kwa muda, two-way mixed-design ANOVA yenye muundo wa kundi × muda ilitumika; ulinganisho wa jozi katika kila time point ulifanywa kwa Tukey test.

Kwa kuwa alama ya histopatholojia ya ini ilichukuliwa kuwa ordinal, Kruskal-Wallis test ilitumika na kisha Dunn multiple-comparison test. Kiwango cha significance ya takwimu kiliwekwa kuwaP<0,05. Thamani ya P iliyo chini ya kizingiti hiki inaonyesha kwamba tofauti iliyozingatiwa kati ya makundi ni isiyotarajiwa kwa kiwango cha takwimu chini ya null hypothesis iliyofafanuliwa; thamani ya P peke yake haionyeshi ukubwa wa athari ya kibiolojia au umuhimu wa kliniki.

Matokeo ya kimetaboliki

Uzito wa mwili ulipanda juu ya udhibiti katika makundi ya LV na HLV kuanzia wiki ya tatu, na tofauti ikawa wazi zaidi baada ya wiki ya nne. Hata hivyo, mwisho wa jaribio HLV kuwa nzito kuliko LV haikuwa muhimu kitakwimu. Kwa hiyo, haiwezi kusemwa kwamba “lishe yenye mafuta mengi iliongeza kwa kiasi muhimu zaidi uzito wa mwili katika kundi la letrozole”.

OGTT ilionyesha picha ya kina zaidi. Mwanzoni, viwango vya glukosi vya LV na HLV vilikuwa juu ya udhibiti. Katika dakika ya 30, HLV ilikuwa juu kuliko LV kwa kiasi muhimu (P<0,05). Katika dakika ya 60 pia HLV iliripotiwa kuwa juu kuliko LV (P<0,01). Kinyume chake, katika dakika ya 90 na 120 tofauti kati ya LV na HLV haikuwa tena muhimu. Kwa hiyo, athari ya lishe yenye mafuta mengi haikuwa sawa katika kila sehemu ya mkondo wa muda.

Mzunguko wa estrus ulitathminiwa kwa vaginal smear. Katika kundi la CON mzunguko ulikuwa wa kawaida, huku katika wengi wa makundi ya LV na HLV ukiwa umevurugika. Hata hivyo, chanzo katika sehemu ya Materials and methods hakielezi kwa undani utaratibu wa kuchukua sampuli, kupaka rangi na kuainisha awamu za vaginal smear; kwa hiyo, matokeo yamewasilishwa kwa kiwango kilichoripotiwa na chanzo.

Matokeo ya ovari na uterasi

Jambo muhimu katika matokeo haya ni kwamba kundi la HLV halikuwa baya zaidi kuliko LV katika kila kiashiria cha uzazi. Kwa mfano, kipenyo cha uterasi ni kikubwa zaidi katika HLV kuliko LV; yaani kupungua kulikoonekana katika kundi la letrozole ni kwa kiwango kidogo katika HLV. Kinyume chake, idadi ya follicles za atretic ilikuwa juu zaidi kwa kiasi muhimu katika HLV.

Kiasi cha corpus luteum pia kinahitaji uangalifu. Maandishi ya matokeo ya chanzo yanaeleza kuwa LV iko chini ya udhibiti na HLV inaonyesha “ongezeko la sehemu” hadi 339,12±212,65 mm³. Katika Figure 2 ya chanzo, alama † inaonekana juu ya ulinganisho wa LV–HLV. Kwa kuwa maandishi hayafafanui kando thamani ya P ya ulinganisho huu wa jozi, tofauti ya utoaji taarifa kati ya figura na maandishi imehifadhiwa hapa.

Histolojia ya ini, kongosho na tishu ya mafuta ya visceral

Muundo wa lobular ulihifadhiwa katika ini la udhibiti. Katika kundi la LV, vakuolization nyepesi ya hepatocytes na matone ya lipid ya eneo fulani yalionekana, huku katika kundi la HLV kukiwa na mkusanyiko mpana zaidi wa mafuta, ballooning ya hepatocytes na infiltration iliyo wazi zaidi ya seli za uvimbe.

Katika maandishi ya matokeo ya chanzo, alama za shughuli za ini zimeandikwa kuwa 2,60±1,58 kwa CON, 4,60±1,53 kwa LV na 6,67±0,52 kwa HLV. LV na HLV ziko juu ya udhibiti; HLV pia imeripotiwa kuwa juu kuliko LV (P<0,05). Hata hivyo, kama ilivyoelezwa hapo juu, kwa kuwa kuna kutokulingana ndani ya chanzo kati ya median/IQR na uwasilishaji wa “±”, thamani hizi hazijaainishwa upya kitakwimu.

Kipenyo cha wastani cha adipocyte katika tishu ya mafuta ya visceral kilikuwa 45,71±5,10 µm katika CON, 57,38±7,50 µm katika LV na 79,09±6,80 µm katika HLV. HLV ilikuwa kubwa zaidi kuliko LV kwa kiasi muhimu (P<0,0001). Hii ni mojawapo ya athari za histomorphometry zilizo wazi zaidi ambazo lishe yenye mafuta mengi iliongeza juu ya msingi wa letrozole.

Waandishi wanatafsiri kipindi cha wiki saba cha lishe yenye mafuta mengi kama kipindi kinachonasa zaidi mabadiliko ya mapema ya tishu ya mafuta ya visceral — hasa hypertrophy ya adipocytes na activation ya jeni za lipogenic. Tathmini kwamba infiltration ya seli za uvimbe iliyokaa inaweza kukua baada ya mfiduo mrefu zaidi wa HFD imetolewa katika majadiliano ya utafiti kwa kutegemea fasihi ya awali; si matokeo ya moja kwa moja ya time-series ya jaribio hili.

Immunofluorescence ya kongosho na matokeo ya TUNEL

Makundi yote mawili ya PCOS yalionyesha ishara ya fluorescence ya insulini ya kongosho iliyo chini na TUNEL positivity iliyo juu kuliko kundi la udhibiti. Hata hivyo, hakuna tofauti ya ziada iliyo muhimu iliyopatikana kati ya HLV na LV. Kwa hiyo, haijaonyeshwa kwamba katika protokali hii ya wiki saba lishe yenye mafuta mengi ilisukuma viashiria vya uharibifu wa islet za kongosho zaidi ya kiwango kilichosababishwa na letrozole.

Maandishi ya matokeo ya chanzo yanaeleza thamani 61,79/31,24/30,98 kama “uwiano wa eneo lenye insulin-positive”, huku mhimili wa y wa Figure 4 ukitumia “relative insulin fluorescence intensity”. Kwa sababu ya tofauti hii ya istilahi, thamani zimehifadhiwa hapa kama “kipimo cha immunofluorescence” bila kupewa kitengo halisi cha asilimia.

Immunofluorescence ya CYP19A1 na AMH katika ovari

Ishara ya CYP19A1 ilikuwa zaidi katika eneo la corpus luteum katika kundi la udhibiti, huku katika makundi ya LV na HLV ikawa imeenea zaidi katika eneo la follicular. Ishara ya AMH pia iliongezeka katika LV na HLV, huku mabadiliko makubwa zaidi yakionekana katika HLV. Matokeo haya yanaendana na tafsiri kwamba follicular microenvironment hubadilika chini ya msongo wa kimetaboliki na endocrine kwa pamoja; hata hivyo, kwa kuwa usanisi wa homoni au viwango vya homoni vinavyozunguka havikupimwa moja kwa moja, hitimisho za ziada za homoni haziwezi kutolewa.

Ekspresheni ya jeni katika ini na tishu ya mafuta

Jedwali hili linaonyesha wazi hitimisho la “kuzorota kwa kuchagua” la utafiti. Vipengele vingi vya msingi vya uashiriaji wa insulini tayari vilikuwa vimepungua kwa kiasi kikubwa katika kundi la LV na ingawa vinaonekana kuwa chini zaidi kwa nambari katika HLV, kwa mujibu wa maandishi ya chanzo tofauti nyingi za LV–HLV si muhimu. Kinyume chake, baadhi ya viashiria vinavyohusiana na uzalishaji wa glukosi/lipogenesis kama PEPCK, G6Pase, SREBP-1c na ACC viliongezeka katika HLV zaidi ya LV.

Jeni za uvimbe hazikutenda kwa mwelekeo mmoja pia. TNF-α na IL-1β zilikuwa juu katika HLV kuliko LV; IL-18 ilibadilika kwa mwelekeo kinyume na ikapatikana chini kwa kiasi muhimu katika HLV kuliko LV. Hata hivyo, kiwango cha IL-18 katika HLV kilibaki juu ya udhibiti. Kwa hiyo, chanzo hakiungi mkono hitimisho kwamba “lishe yenye mafuta mengi iliongeza zaidi viashiria vyote vya uvimbe”.

Kutokulingana ndani ya chanzo kwa INSR:simulizi la matokeo na muhtasari vinasema hakuna tofauti muhimu kati ya LV na HLV katika viashiria vya INSR ikiwa ni pamoja na INSR/IRS-1/IRS-2/AKT/PI3K/GLUT4. Hata hivyo, grafu ya INSR katika Figure 6A ya chanzo ina alama † kati ya LV–HLV, na maelezo ya figura yanafafanua † kama ulinganisho wa LV–HLV wenye P<0,05. Kwa sababu vipengele hivi viwili vya chanzo havikubaliani, Verianla haichagui hapa tofauti ya LV–HLV kwa INSR kama hitimisho la kisayansi la uhakika.

Zaidi ya hayo, sehemu ya mbinu inasema RNA ilitolewa kutoka ini na VAT, na majadiliano yanatafsiri kwa pamoja mabadiliko ya uashiriaji wa insulini katika ini na VAT. Hata hivyo, paneli za nambari A–D za Figure 6 ya chanzo zimewekewa lebo ya ini, na paneli E ya viashiria vya adipose lipogenesis. Thamani tofauti za nambari za INSR/IRS/PI3K/AKT/GLUT4 kwa VAT hazitolewi katika PDF kama paneli huru. Kwa hiyo, hakuna matokeo ya nambari ya VAT insulin-signaling genes yasiyoonyeshwa katika chanzo yaliyotengenezwa hapa.

Je, Lishe yenye Mafuta Mengi Ilizidisha Matatizo Yote Katika Kundi la Letrozole?

Hapana. Athari ya lishe yenye mafuta mengi ni ya kuchagua: katika kundi la HLV, ikilinganishwa na LV, mabadiliko ya ziada yalionekana katika vipimo kama PEPCK, G6Pase, SREBP-1c, ACC, TNF-α, IL-1β, kipenyo cha adipocyte, baadhi ya viashiria vya ovari, CYP19A1 na AMH; huku hakuna tofauti ya ziada iliyo muhimu kati ya LV–HLV iliyoonyeshwa katika uzito wa mwili, glukosi ya kufunga, lipidi za seramu, fluorescence ya insulini ya kongosho, TUNEL positivity, FAS, CPT1a, ACOX1 na viashiria vingi vya msingi vya uashiriaji wa insulini.

Tafsiri kuu ya kisayansi ya utafiti

Modeli iliunganisha katika jaribio moja matatizo ya uzazi/endocrine yanayosababishwa na letrozole na msongo wa kimetaboliki unaosababishwa na lishe yenye mafuta mengi, na kufanya mabadiliko ya wakati mmoja katika ini, tishu ya mafuta ya visceral, kongosho na ovari yaonekane. Athari za ziada zenye nguvu zaidi za HFD zinaonekana hasa katika steatosis ya ini, hypertrophy ya adipocytes za visceral, jeni zinazohusiana na hepatic gluconeogenesis, lipogenesis ya tishu ya mafuta na baadhi ya viashiria vya ovari.

Hata hivyo, data ya utafiti haithibitishi mekanizimu fulani ya mstari kutoka mwanzo hadi mwisho. Kwa mfano, mnyororo “insulin resistance → compensatory hyperinsulinemia → kuongezeka kwa uzalishaji wa androgen katika ovari → follicular dysfunction” umejadiliwa kibiolojia; lakini jaribio hili halikupima insulin ya seramu, androgen za seramu au HOMA-IR. Kwa hiyo, haijabainishwa kwa majaribio kwamba mnyororo huu ulitokea kwa mpangilio gani katika panya hawa.

Vizuizi vikuu

Kizuizi cha kwanza ni kwamba hii ni modeli ya panya. Kuna tofauti muhimu kati ya panya na binadamu katika mzunguko wa estrus/menstrual, fiziolojia ya ovari na usambazaji wa tishu ya mafuta. Si sahihi kuhamisha matokeo moja kwa moja kwa binadamu.

Kizuizi cha pili ni kwamba sehemu muhimu ya tathmini ya uashiriaji wa insulini inategemea ekspresheni ya mRNA. Watafiti wameeleza hitaji la viashiria maalumu vya phosphorylation kama p-AKT na p-INSR na uthibitishaji wa ziada wa immunohistochemistry.

Kizuizi cha tatu ni kutopimwa kwa insulin ya seramu, viwango vya androgen na HOMA-IR. Upungufu huu unazuia uhusiano wa hyperinsulinemia-hyperandrogenism kuthibitishwa moja kwa moja katika jaribio hili.

Kizuizi cha nne ni kipimo cha muda. Utafiti ulitathmini tishu mwishoni mwa matumizi ya HFD ya wiki saba. Huu si muundo wa longitudinal unaobainisha mpangilio ambao fenotipu inayofanana na PCOS huendelea, kama inaweza kurejea, au jinsi inavyobadilika chini ya mfiduo mrefu zaidi.

Waandishi wanapendekeza kwamba tafiti zijazo zifuatilie kwa muda profaili za homoni, matokeo ya fertility, viashiria vya ovarian reserve kama AMH, na jamii za vijidudu vya utumbo.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Kichwa asilia:High-fat diet exacerbates hepatic and adipose insulin signaling impairment and ovarian lesions in a rat model of letrozole-induced polycystic ovary syndrome

Waandishi:Sunju So, Sujin Kwon, La Yoon Choi, Dae Yong Kim, Mi Hye Kim.

Mchango sawa:Hakuna taarifa ya equal first author/equal contribution iliyotambuliwa katika PDF ya chanzo.

Mwandishi wa mawasiliano:Mi Hye Kim.

Taasisi:College of Korean Medicine, Woosuk University, Jeonju, Jeonbuk State 54986, Republic of Korea.

Jarida:Molecular Medicine Reports.

Mchapishaji:Spandidos Publications.

Juzuu / toleo / makala:34 / 5 / Article 308.

DOI:10.3892/mmr.2026.14019.

Tarehe ya kupokelewa:22 Juni 2026.

Tarehe ya kukubaliwa:28 Agosti 2026.

Uchapishaji mtandaoni:15 Septemba 2026.

Aina ya chanzo:Makala asilia ya utafiti; jaribio la wanyama la in vivo lililodhibitiwa. Si utafiti wa kliniki kwa binadamu.

Peer review:Sera rasmi ya uchapishaji ya Molecular Medicine Reports inaeleza kuwa makala hupitia peer review kabla ya kukubaliwa na hukaguliwa na angalau reviewers wawili wa kitaaluma.

Leseni:PDF ya chanzo na rekodi ya PMC zinaonyesha leseni ya Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International (CC BY-NC-ND 4.0). Kwa hiyo, picha asilia za histolojia, immunofluorescence na michoro ya chanzo hazijachapishwa upya kwa kunakili moja kwa moja au kwa urekebishaji wa karibu wa kuona. Mchoro ndani ya Verianla ni maelezo huru ya kuona ya mahusiano ya kisayansi yaliyoripotiwa wazi katika chanzo.

Maadili ya jaribio:Woosuk University Institutional Animal Care and Use Committee, idhini no. WS-2024-04.

Ufadhili:National Research Foundation of Korea (NRF), Serikali ya Korea MSIT; grant no. RS-2024-00338574.

Upatikanaji wa data:Imeelezwa kuwa data iliyozalishwa katika utafiti inaweza kuombwa kutoka kwa mwandishi wa mawasiliano.

Mgongano wa maslahi:Waandishi wametangaza kwamba hakuna mgongano wa maslahi.

Michango ya waandishi:MHK alichangia conceptualization na design ya utafiti. SS, SK na LYC walishiriki katika uchambuzi wa data na utafiti. LYC, DYK na MHK walichangia tathmini ya histopathology na tafsiri ya data ya majaribio; LYC, DYK na MHK waliripoti kwamba walithibitisha uhalisi wa data ghafi. SS aliandaa rasimu ya kwanza ya makala; MHK na DYK walitoa revision na supervision. Waandishi wote walisoma na kuidhinisha maandishi ya mwisho.

Maonyo ya utoaji taarifa ndani ya chanzo:(1) Alama ya MASLD inaelezwa kama median/IQR katika mbinu na maelezo ya figura, huku maandishi ya matokeo yakitoa thamani kwa muundo wa “±”. (2) Kwa INSR, maandishi ya matokeo yanachukulia tofauti ya LV–HLV kuwa si muhimu, huku Figure 6A ikionyesha alama † kati ya LV–HLV. (3) Tofauti ya kipenyo cha uterasi LV–HLV imetolewa kama P<0,05 katika maandishi ya matokeo, huku grafu ya Figure 2 ikiwa na alama †††. (4) Ingawa TNF, IL-1β na IL-18 hazijaorodheshwa katika orodha ya target genes kwenye aya ya mbinu ya qPCR, jedwali la primers na grafu ya matokeo zinajumuisha jeni hizi. (5) Ingawa chanzo kinajadili impairment ya insulin-signaling katika ini na VAT, Figure 6 haitoi paneli tofauti ya nambari kwa VAT INSR/IRS/PI3K/AKT/GLUT4. Hoja hizi hazijasahihishwa kimya kimya na Verianla; kutokuwa na uhakika kumehifadhiwa.

Kikomo kikuu cha tafsiri:Utafiti unaunga mkono kwamba modeli ya panya HFD+LET inaweza kuakisi kwa pamoja baadhi ya sifa za kimetaboliki na uzazi za PCOS inayohusiana na unene kupita kiasi. Si ushahidi wa moja kwa moja wa ufanisi wa kliniki, mafanikio ya matibabu au mpangilio wa muda wa hyperinsulinemia-hyperandrogenism kwa binadamu.