Cinnamaldehyde (cinnamaldehyde, CA) ni kiambato asilia ambacho ni mojawapo ya viambato vikuu hai vya kibayolojia katika mafuta tete ya mdalasini, na katika utafiti huu athari zake za antibakteria, kupunguza uvimbe na kipinga kioksidishaji dhidi ya uvimbe wa tezi ya maziwa unaosababishwa na Staphylococcus aureus zilichunguzwa. Watafiti walichunguza athari ya CA katika mfano wa mastitis wa panya in vivo na pia katika seli za epitheliamu ya tezi ya maziwa ya ng'ombe za MAC-T in vitro. Kwa panya, matibabu ya CA yalipunguza ukoloni wa bakteria, shughuli ya myeloperoxidase (MPO) inayohusishwa na neutrofili, saitokini za uvimbe na uharibifu wa kihistopatholojia; huku yakiimarisha njia ya kipinga kioksidishaji ya Nrf2/HO-1/xCT na kukandamiza njia ya uvimbe ya TLR4/NF-κB. Katika seli za MAC-T, ushikaji na uvamizi wa bakteria ulipungua, aina tendaji za oksijeni ndani ya seli (ROS) zilipungua, wapatanishi wa uvimbe walikandamizwa, usemi wa protini za miunganisho thabiti uliongezeka na wasifu wa protini zinazohusiana na apoptosis ukaboreshwa.

Tafsiri ya kimakanika ya utafiti ni kwamba CA inaweza kutenda kupitia njia mbili zinazokamilishana: kudhibiti moja kwa moja ishara za uvimbe na msongo wa kioksidishaji katika seli mwenyeji, na kupunguza kwa njia isiyo ya moja kwa moja kichocheo kinachotokana na pathojeni kwa kupunguza mzigo wa bakteria katika tishu za tezi ya maziwa. Hata hivyo, utafiti haukuonyesha ni kipokezi gani mahususi cha kinga kinachoingiliana moja kwa moja na CA. Muhimu zaidi, uthibitishaji wa in vivo ulifanywa katika mfano wa panya pekee; famakokinetiki, usalama wa muda mrefu, dozi bora na ufanisi wa matibabu ya mastitis katika ng'ombe wa maziwa bado haujabainishwa.

Kwa nini mastitis na Staphylococcus aureus ni muhimu?

Mastitis ni ugonjwa wa uvimbe wa tezi ya maziwa unaohusishwa zaidi na maambukizi na unaweza kuwa na athari muhimu katika uzalishaji wa maziwa, ubora wa maziwa na uadilifu wa tishu za tezi ya maziwa. Staphylococcus aureus ni mojawapo ya visababishi muhimu, hasa katika mastitis ya ng'ombe isiyo na dalili dhahiri. Uwezo wa bakteria kushikamana na epitheliamu ya tezi ya maziwa, kuvamia seli na kuunda biofilm huchangia kudumu kwa maambukizi.

Wakati wa maambukizi, miundo ya bakteria huamsha mfumo wa kinga wa asili. Uanzishaji huu unaweza kuongeza uhamaji wa seli za uvimbe kuelekea tishu za tezi ya maziwa na uzalishaji wa saitokini za kuchochea uvimbe kama TNF-α, IL-1β na IL-6. Uvimbe usiodhibitiwa au unaodumu kwa muda mrefu unaweza kusababisha uharibifu wa kimuundo katika tishu za tezi ya maziwa.

Kwa nini kiambato cha asili ya mimea kilichunguzwa?

Antibiotiki ni zana muhimu katika kudhibiti maambukizi ya ndani ya tezi ya maziwa; hata hivyo, hali ambazo mafanikio ya matibabu yanaweza kuwa machache pamoja na tatizo la usugu wa vimelea dhidi ya dawa zimeongeza utafiti wa mbinu mpya. Katika muktadha huu, utafiti ulichunguza athari ya cinnamaldehyde, ambayo hapo awali iliripotiwa kuwa na sifa za antibakteria, kupunguza uvimbe na kipinga kioksidishaji, katika uvimbe wa tezi ya maziwa unaosababishwa na S. aureus na njia zinazohusiana za molekuli.

Cinnamaldehyde ilipunguza uvimbe wa tezi ya maziwa katika utafiti huu kupitia taratibu zipi?

Matokeo ya majaribio yanaonyesha kwamba cinnamaldehyde ilipunguza mzigo wa S. aureus na ushikaji/uvamizi wa seli huku ikikandamiza ishara ya uvimbe ya TLR4/NF-κB, kuimarisha ulinzi wa kipinga kioksidishaji wa Nrf2/HO-1/xCT, kupunguza mkusanyiko wa ROS na kubadilisha wasifu wa protini zinazohusiana na apoptosis kuelekea upande wa ulinzi; hata hivyo, kipokezi mahususi cha kinga ambacho CA hufungamana nacho moja kwa moja hakikubainishwa katika utafiti huu.

Njia ya uvimbe ya TLR4/NF-κB

Kipokezi kinachofanana na Toll 4 (TLR4) ni mojawapo ya mifumo ya kutambua mifumo katika kinga ya asili. Ishara zinazopitishwa na TLR4 zinapoamsha njia ya NF-κB, fosforilesheni ya kitengo kidogo cha p65 inaweza kuongezeka na usemi wa jeni za kuchochea uvimbe unaweza kuimarika. Katika utafiti, maambukizi ya S. aureus yaliongeza usemi wa TLR4, kiwango cha p-p65 na uwiano wa Bax/Bcl-2 katika tishu za tezi ya maziwa ya panya. Dozi zinazoongezeka za CA zilibadilisha mabadiliko haya katika mwelekeo wa kinyume.

Katika seli za MAC-T pia, CA ilipunguza usemi wa TLR4 na fosforilesheni ya p65 iliyoongezwa na S. aureus. Katika mfano huo huo wa seli, pamoja na IL-1β, IL-6 na TNF-α, viwango vya mRNA vya wapatanishi wanaohusiana na uvimbe kama AP-1, iNOS, MCP-1 na Myd88 pia vilipungua.

Njia ya kipinga kioksidishaji ya Nrf2/HO-1/xCT

Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) ni mojawapo ya wadhibiti muhimu wa ulinzi wa seli dhidi ya msongo wa kioksidishaji. Uanzishaji wa Nrf2 unaweza kuongeza usemi wa viambato vya kipinga kioksidishaji vya mkondo wa chini kama HO-1 na xCT. xCT ni kitengo kidogo cha mfumo wa cystine/glutamate antiporter unaohusiana na kimetaboliki ya glutathione ya seli.

Wakati maambukizi ya S. aureus yalipunguza viwango vya protini za Nrf2, HO-1 na xCT katika tishu za tezi ya maziwa ya panya, matibabu ya CA yaliongeza usemi wa protini hizi kulingana na dozi. Wakati huo huo, MDA, kiashiria cha peroksidesheni ya lipidi, ilipungua; shughuli za SOD na GSH-Px zinazohusiana na ulinzi wa kipinga kioksidishaji ziliongezeka. Katika seli za MAC-T pia, CA iliongeza usemi wa jeni na protini za Nrf2/HO-1/xCT na kupunguza mkusanyiko wa ROS ndani ya seli uliopimwa kwa fluoresensi ya DCFH-DA.

Kwa nini njia za TLR4/NF-κB na Nrf2/HO-1/xCT ni muhimu kwa pamoja?

Katika utafiti huu, njia hizo mbili zinawakilisha matatizo tofauti lakini yanayohusiana ya kibayolojia: mhimili wa TLR4/NF-κB unahusishwa na ishara ya uvimbe inayochochewa na maambukizi, huku mhimili wa Nrf2/HO-1/xCT ukihusishwa na msongo wa kioksidishaji na ulinzi wa kipinga kioksidishaji; ukweli kwamba CA ilibadilisha mihimili yote miwili katika mwelekeo wa ulinzi ndani ya mifumo ile ile ya majaribio unaonyesha kuwa athari iliyozingatiwa haiwezi kupunguzwa kuwa ukandamizaji wa saitokini pekee au athari ya kipinga kioksidishaji pekee.

Athari kwenye apoptosis

Katika maambukizi ya S. aureus, Bax, caspase-3, caspase-9 na cytochrome c (Cytc) za kuendeleza apoptosis ziliongezeka huku Bcl-2 ya kupinga apoptosis ikipungua. Matibabu ya awali kwa CA yalibadilisha mabadiliko haya katika seli za MAC-T. Katika tishu za tezi ya maziwa ya panya pia, uwiano wa Bax/Bcl-2 uliokuwa umeongezeka kwa maambukizi ulipungua kadiri dozi ya CA ilivyoongezeka. Matokeo haya yanaonyesha kwamba kupungua kwa uharibifu wa uvimbe na oksidishaji kuliambatana pia na mabadiliko katika ishara za kifo cha seli.

Matokeo kuhusu ulinzi wa kizuizi cha epitheliamu

Maambukizi ya S. aureus yalipunguza usemi wa mRNA wa occludin, claudin-4 na ZO-1 katika seli za MAC-T. Matibabu ya awali kwa CA yaliongeza usemi wa protini hizi za miunganisho thabiti. Watafiti walihusisha matokeo haya na kuhifadhiwa kwa uadilifu wa kizuizi cha epitheliamu ya tezi ya maziwa.

Kwa nini ushikaji na uvamizi wa bakteria vilipimwa kando?

Kushikamana kwa bakteria na uso wa epitheliamu na kuingia kwake ndani ya seli si hatua moja ya kibayolojia. Katika utafiti, jaribio la ushikaji lilibuniwa kutathmini bakteria wote wanaohusiana na seli, huku jaribio la uvamizi likibuniwa kutathmini bakteria walioingia ndani ya seli baada ya bakteria wa nje ya seli kuondolewa kwa gentamicin.

Katika matokeo haya, inafaa kuzingatiwa kwamba mkusanyiko wa juu zaidi haukutoa athari yenye nguvu zaidi katika kila kipimo. Hasa, viwango vya ushikaji na uvamizi vilikuwa vya chini katika 25 µM kuliko katika 50 µM. Kwa hiyo, matokeo ya in vitro hayapaswi kuelezewa kwa modeli rahisi ya “kadiri dozi inavyoongezeka, ndivyo athari inavyoendelea kuongezeka”.

Uhai wa seli na uchaguzi wa mkusanyiko wa majaribio

Jaribio la CCK-8 lilitumika kutathmini athari ya CA kwenye uhai wa seli za MAC-T. Chanzo kinaripoti kwamba katika mikusanyiko ya chini ya 50 µM uhai wa seli haukuathiriwa kwa kiasi kikubwa, huku katika mikusanyiko ya juu ya 50 µM uhai ulipungua. Katika majaribio ya uvimbe, mikusanyiko ya 15, 25 na 50 µM ilijaribiwa; 25 µM ilionyesha athari dhahiri zaidi katika kukandamiza viwango vya mRNA vya IL-1β, IL-6 na TNF-α.

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

Muundo wa jaribio la wanyama

Utafiti ulitumia jumla ya panya 35 wa Kunming wenye umri wa wiki 7–8 na uzito wa 20–25 g. Wanyama waligawanywa kwa nasibu katika makundi matano na kila kundi lilikuwa na panya saba:

Panya waliwekwa kwa kipindi cha wiki moja cha kuzoea katika hali ya 24 ± 1 °C na unyevunyevu wa jamaa wa %65. Baada ya ganzi, 100 µL ya suspenzi mpya yenye msongamano wa 1 × 10⁶ CFU/mL ya S. aureus iliingizwa kwenye mfereji wa tezi ya maziwa; kundi la udhibiti lilipokea kiasi sawa cha PBS tasa. Saa 12 baada ya maambukizi, CA ilitolewa kwa njia ya intraperitoneal mara tatu katika dozi za 5, 25 au 50 mg/kg kwa vipindi vya saa sita. Saa 24 baada ya kuundwa kwa modeli, seramu na tishu za tezi ya maziwa zilikusanywa kwa uchambuzi uliofuata.

Vipimo gani vilifanywa katika mfano wa panya?

• Histopatholojia ya tezi ya maziwa kwa rangi ya hematoxylin-eosin na alama ya uharibifu wa tishu kati ya 0–4.
• Shughuli ya MPO kama kiashiria cha uingizaji wa neutrofili.
• Upimaji wa ukoloni wa S. aureus katika tishu za tezi ya maziwa kwa kuhesabu koloni.
• Tathmini ya IL-1β, IL-6 na TNF-α kwa RT-qPCR na ELISA.
• Tathmini ya msongo wa kioksidishaji/uwezo wa kipinga kioksidishaji kwa MDA, SOD na GSH-Px.
• Tathmini ya protini kama TLR4, p65, p-p65, Nrf2, HO-1, xCT, Bax na Bcl-2 kwa Western blot.

Matokeo makuu katika mfano wa panya

Katika kundi la udhibiti, muundo wa tezi ya maziwa ulihifadhiwa kwa kiasi kikubwa, huku katika kundi la S. aureus kukiwa na uingizaji mkubwa wa seli za uvimbe na neutrofili, kuta za mifereji zilizonenepa na mipaka ya duct isiyo wazi zaidi. Katika makundi ya CA, uharibifu wa tishu ulipungua na maboresho haya yalionekana zaidi katika kundi la dozi kubwa.

Shughuli ya MPO iliongezeka katika kundi la maambukizi na ilipungua kadiri dozi ilivyoongezeka katika makundi yaliyopokea CA. Ukoloni wa S. aureus katika tishu za tezi ya maziwa pia ulipungua kwa kiasi kikubwa kwa matibabu ya CA; katika jaribio la ukoloni, p < 0,01 iliripotiwa kwa tofauti kati ya makundi.

Kwa upande wa msongo wa kioksidishaji, maambukizi yaliongeza MDA na kupunguza shughuli za SOD na GSH-Px. CA ilibadilisha mabadiliko haya katika mwelekeo wa kinyume. Usemi wa protini za Nrf2, HO-1 na xCT pia uliongezeka kwa kutegemea dozi ya CA.

Kwa upande wa uvimbe, viwango vya IL-1β, IL-6 na TNF-α vilivyoongezeka kwa maambukizi vilipungua baada ya CA kutolewa. Usemi wa TLR4, fosforilesheni ya p65 na uwiano wa Bax/Bcl-2 pia ulipungua kadiri dozi ya CA ilivyoongezeka.

Muundo wa mfano wa seli za MAC-T

Seli za epitheliamu ya tezi ya maziwa ya ng'ombe za MAC-T zilikuzwa katika mazingira ya DMEM, 37 °C na %5 CO₂. Katika maambukizi ya S. aureus, MOI = 100 ilitumika na seli ziliambukizwa kwa saa sita. Makundi ya CA yalipokea matibabu ya awali katika mazingira yenye CA kwa saa 24 kabla ya maambukizi.

Katika modeli ya seli, jaribio la uhai la CCK-8, majaribio ya ushikaji na uvamizi wa bakteria, fluoresensi ya ROS kwa DCFH-DA, RT-qPCR na Western blot vilitumika. Katika jaribio la uvamizi, 100 µg/mL gentamicin ilitumika kwa dakika 45 ili kuondoa bakteria wa nje ya seli; bakteria walioingia ndani ya seli baadaye walitathminiwa kwa lysis na kuhesabu koloni.

Matokeo makuu katika seli za MAC-T

Matibabu ya awali kwa CA yalipunguza ongezeko la IL-1β, IL-6 na TNF-α lililosababishwa na S. aureus. Ingawa mikusanyiko yote ya 15, 25 na 50 µM ilikuwa na athari, 25 µM ilionyesha athari dhahiri zaidi katika kukandamiza usemi wa mRNA wa saitokini za uvimbe.

CA ilipunguza kwa kiasi kikubwa ushikaji wa bakteria kwenye seli za MAC-T na uvamizi wake ndani ya seli. Usemi wa protini na mRNA wa Nrf2, HO-1 na xCT uliongezeka; mkusanyiko wa ROS ndani ya seli ulipungua.

Usemi wa mRNA wa AP-1, iNOS, MCP-1 na Myd88 ulipungua huku usemi wa occludin, claudin-4 na ZO-1 ukiongezeka. Katika uchambuzi wa Western blot, TLR4 na fosforilesheni ya p65 vilipungua.

Katika uchambuzi wa apoptosis, maambukizi ya S. aureus yaliongeza usemi wa Bax, caspase-3, caspase-9 na Cytc huku yakipunguza Bcl-2; matibabu ya awali kwa CA yalibadilisha mabadiliko haya.

Uchambuzi wa takwimu

Msongamano wa bendi za Western blot ulichambuliwa kwa ImageJ 1.51j na kurekebishwa kulingana na GAPDH au β-actin. Data za majaribio zilitathminiwa kwa uchambuzi wa tofauti wa njia moja kwa kutumia OriginPro 2018 na matokeo yaliripotiwa kama wastani ± mkengeuko wa kawaida. Katika grafu, makundi yenye herufi ndogo tofauti yalichukuliwa kuwa tofauti kitakwimu katika kiwango cha p < 0,05. Majaribio ya seli yalitathminiwa kupitia majaribio matatu huru.

Je, matokeo haya yanaonyesha moja kwa moja kwamba matibabu ya mastitis yanafaa katika ng'ombe wa maziwa?

Hapana. Ushahidi wa in vivo wa utafiti unatokana na mfano wa mastitis wa panya, na ushahidi wa in vitro unatokana na seli za epitheliamu ya tezi ya maziwa ya ng'ombe za MAC-T; famakokinetiki, njia inayofaa ya utoaji, dozi bora, usalama wa muda mrefu, mabaki katika maziwa au mafanikio ya matibabu ya kliniki katika ng'ombe wa maziwa hayakujaribiwa moja kwa moja katika utafiti huu.

Hitimisho zinazoungwa mkono na utafiti

• CA ilipunguza ukoloni wa S. aureus katika mfano wa mastitis wa panya.
• CA ilipunguza uingizaji wa seli za uvimbe na shughuli ya MPO katika tezi ya maziwa ya panya.
• CA ilipunguza viashiria vya kuchochea uvimbe kama TNF-α, IL-1β na IL-6 katika panya.
• CA ilikandamiza mabadiliko ya protini yanayohusiana na uanzishaji wa TLR4/NF-κB.
• CA iliimarisha njia ya kipinga kioksidishaji ya Nrf2/HO-1/xCT katika tishu za panya na pia katika seli za MAC-T.
• CA ilipunguza ushikaji na uvamizi wa S. aureus katika seli za MAC-T.
• CA ilipunguza mkusanyiko wa ROS katika seli za MAC-T na kuongeza usemi wa protini za miunganisho thabiti.
• CA ilibadilisha wasifu wa protini za apoptosis unaohusiana na maambukizi kuelekea upande wa ulinzi.

Hitimisho zisizoungwa mkono na utafiti

• Utafiti huu haukuonyesha kwamba CA hutibu mastitis ya kliniki katika ng'ombe wa maziwa.
• Haijathibitishwa kliniki kwamba CA inaweza kutumiwa moja kwa moja badala ya antibiotiki.
• Haijaonyeshwa kwamba dozi za 5–50 mg/kg zilizotumiwa kwa panya zinaweza kuhamishwa moja kwa moja kwa ng'ombe wa maziwa.
• Haijaonyeshwa kwamba mkusanyiko wa 25 µM katika utamaduni wa seli unalingana na mkusanyiko wa kitabibu katika plasma au tishu za tezi ya maziwa ya mnyama hai.
• Sumu ya muda mrefu, famakokinetiki na mabaki ya maziwa/nyama hayakutathminiwa.
• TLR mahususi au kipokezi kingine cha kinga ambacho CA hufungamana nacho moja kwa moja hakikubainishwa.
• Utafiti haukujaribu matumizi yasiyodhibitiwa ya bidhaa za asili za mdalasini au mafuta tete ya mdalasini katika matibabu ya wanyama.

Mapungufu makuu ya utafiti

Kizuizi muhimu zaidi ni kwamba uthibitishaji wa in vivo ulifanywa katika mfano wa mastitis wa panya, si katika ng'ombe wa maziwa. Ingawa modeli ya MAC-T hutoa mfumo wa seli ulio karibu zaidi na biolojia ya epitheliamu ya tezi ya maziwa ya ng'ombe, utamaduni wa seli hauwezi kuunda upya kimetaboliki, kinga, mzunguko wa damu, famakokinetiki na mazingira changamano ya tishu za tezi ya maziwa katika mnyama mzima.

Utafiti pia haukutathmini famakokinetiki ya CA, usalama wake wa muda mrefu au mpangilio unaofaa wa dozi kwa ng'ombe wa maziwa. Waandishi wanaona tafiti za baadaye za mfano wa moja kwa moja wa mastitis ya ng'ombe, dozi bora, famakokinetiki na usalama wa muda mrefu kuwa muhimu.

Pia kuna kikomo kuhusu mekanizimu. Matokeo yanaonyesha mahusiano makubwa ya molekuli yanayolingana na ukandamizaji wa TLR4/NF-κB na uanzishaji wa Nrf2/HO-1/xCT; hata hivyo, majaribio haya hayakubainisha ni kipokezi gani mahususi cha kinga au shabaha ya molekuli kinachoingiliana moja kwa moja na CA.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Kichwa asilia: Mechanism of Cinnamaldehyde in Alleviating Staphylococcus aureus-Induced Mammary Inflammatory Response

Waandishi: Xiaohui Chen; Jingge Wang; Huiyuan Ma; Wenbin Jiang; Guiqin Wang.

Mwandishi wa mawasiliano: Guiqin Wang.

Taasisi: College of Resources Environment & Life Sciences, Ningxia Normal University, Guyuan, China; College of Animal Science and Technology, Ningxia University, Yinchuan, China; Key Laboratory of Soil Ecological Health and Microbial Regulation, Ningxia Normal University, Guyuan, China.

Jarida: Animals.

Mchapishaji: MDPI.

Rekodi ya bibliografia: Animals 2026, 16(17), 2742.

DOI: 10.3390/ani16172742

Mchakato wa uchapishaji: Ilipokelewa: 16 Julai 2026; ilifanyiwa marekebisho: 22 Agosti 2026; ilikubaliwa: 26 Agosti 2026; ilichapishwa: 2 Septemba 2026.

Aina ya chanzo: Makala asilia ya utafiti wa majaribio iliyopitiwa na wataalamu.

Leseni: Creative Commons Attribution (CC BY).

Mfano wa wanyama: Jumla ya panya 35 wa Kunming; makundi matano; n = 7/kundi. Matokeo ya in vivo yanahusu mfano wa mastitis wa panya, si ng'ombe wa maziwa.

Mfano wa seli: Mstari wa seli za epitheliamu ya tezi ya maziwa ya ng'ombe MAC-T; katika majaribio ya maambukizi ya seli, MOI 100 na maambukizi ya saa sita yalitumika.

Mbinu kuu: Histopatholojia ya H&E, uchambuzi wa shughuli ya MPO, kuhesabu koloni za bakteria, ELISA, RT-qPCR, uchambuzi wa uhai wa seli wa CCK-8, fluoresensi ya DCFH-DA ROS na Western blot.

Takwimu: Uchambuzi wa tofauti wa njia moja; wastani ± mkengeuko wa kawaida; kiwango kikuu cha umuhimu p < 0,05. Katika jaribio la ukoloni wa bakteria, tofauti ya kiwango cha p < 0,01 iliripotiwa.

Maadili: Majaribio ya wanyama yalifanywa kwa mujibu wa mahitaji ya Ningxia University Animal Welfare and Ethics Committee; rekodi ya maadili iliripotiwa kama NXU-2025-013.

Ufadhili: Natural Science Funds, Ningxia; ufadhili wa 2026AAC030884, 2025AAC020021 na 2026AAC030944.

Upatikanaji wa data: Imeelezwa kwamba data za msingi za utafiti zitatolewa na mwandishi wa mawasiliano kwa ombi la busara.

Mgongano wa maslahi: Waandishi hawakuripoti mgongano wa maslahi.

Michango ya waandishi: Uundaji wa dhana G.W.; metodolojia X.C.; uthibitishaji X.C. na J.W.; uchambuzi rasmi J.W. na H.M.; uchunguzi W.J.; rasilimali J.W., H.M. na W.J.; rasimu asilia X.C.; mapitio/uhariri J.W., H.M., W.J. na G.W.; uoneshaji J.W., H.M. na W.J.; usimamizi G.W.; usimamizi wa mradi X.C. na G.W.; upatikanaji wa ufadhili X.C. na G.W.

Kikomo kikuu cha kimetodolojia: Utafiti unaeleza mekanizimu ya CA katika kiwango cha awali kwa kutumia mfano wa mastitis wa panya na mfumo wa seli za MAC-T. Famakokinetiki ya moja kwa moja katika ng'ombe wa maziwa, usalama wa muda mrefu, mpangilio bora wa dozi na ufanisi wa kliniki havikutathminiwa.