Diaphragma Juglandis Fructus (DJF) бофтаи септумест, ки қисмҳои мағзи дохили меваи чормағзро аз ҳам ҷудо мекунад ва аксаран ҳамчун маҳсулоти иловагӣ боқӣ мемонад. Дар ин таҳқиқот AED (aqueous extract of Diaphragma Juglandis Fructus), яъне экстракти обии септуми чормағз, ки аз DJF бо об омода шудааст, аз нигоҳи таъсирҳои вобаста ба илтиҳоб, монеаи эпителиалии рӯда ва тағйироти метаболикӣ омӯхта шуд. Ин таҳқиқот озмоиши табобати колити захмдор дар одамон нест. Таҳқиқот як кори преклиникист, ки ҳуҷайраҳои макрофагии муши RAW264.7-и бо LPS таҳрикёфта, модели колити шадиди муш бо DSS, транскриптомика, метаболомика, таҳлили шабакавӣ, docking-и молекулавӣ ва симулятсияҳои динамикаи молекулавиро муттаҳид мекунад.

Дар модели ҳуҷайравӣ AED истеҳсоли IL-6, IL-1β ва TNF-α-ро, ки бо ҷавоби илтиҳобии аз ҷониби LPS ба вуҷудомада алоқаманд буданд, коҳиш дод; афзоиши iNOS ва COX-2-ро маҳдуд кард ва сатҳҳои JAK1 ва STAT3-и фосфоршуда паст шуданд. Бо вуҷуди ин, муҳаққиқон намегӯянд, ки роҳи JAK1/STAT3 аз ҷиҳати сабабӣ исбот шудааст. Азбаски дар ин таҳқиқот ингибитсияи JAK1/STAT3 ё озмоиши rescue анҷом дода нашудааст, робитаи мушоҳидашуда бояд ҳамчун робитаи мутобиқ бо механизм, на сабабият тафсир шавад.

Дар таҷрибаи муш 50 муши наринаи C57BL/6 ба панҷ гурӯҳ тақсим шуданд: назорати солим, %3 DSS, 300 mg/kg сулфасалазин, 600 mg/kg AED-и вояи баланд ва 200 mg/kg AED-и вояи паст. DSS дар тӯли ҳафт рӯз ба оби нӯшокӣ дода шуд, AED ё сулфасалазин бошад рӯзона як маротиба тавассути гаважи даҳонӣ истифода гардид. Дар гурӯҳи AED-и вояи баланд коҳиши талафи вазни бадан, пешгирии қисмии кӯтоҳшавии колон, сабуктар шудани осеби гистологӣ ва сатҳи пасттари ифодаи генҳои вобаста ба илтиҳоб гузориш шуд. Дар намунаи рангкунии иммуногистохимиявии сафедаҳои пайвастагии зич, аз ҷумла ZO-1, occludin ва claudin-1, нисбат ба гурӯҳи DSS беҳбудӣ мушоҳида гардид.

Дар таҳлилҳои омикӣ истифодаи AED бо тағйирот дар метаболизми таурин–гипотаурин, роҳҳои вобаста ба аргинин, метаболизми липидҳо ва дигар равандҳои метаболикӣ алоқаманд карда шуд. Фармакологияи шабакавӣ ва моделсозии ҳисоббарорӣ ACE ва омили von Willebrand (VWF)-ро ҳамчун ҳадафҳои эҳтимолӣ пешбарӣ карданд. Аммо ACE ва VWF дар ин таҳқиқот механизмҳои бо таҷрибаҳои биохимиявии тасдиқи ҳадаф собитшуда нестанд; чунон ки муаллифон низ қайд мекунанд, онҳо ҳадафҳои номзаданд, ки дар оянда бояд бо таҷриба санҷида шаванд.

Муҳимтарин ҳадди тафсири таҳқиқот ҳамин аст: AED дар моделҳои ҳуҷайравӣ ва мушӣ бо беҳбудии баъзе нишондиҳандаҳои илтиҳобӣ, гистологӣ, монеавӣ ва метаболикии вобаста ба колит алоқаманд буд; аммо ин натиҷаҳо исбот намекунанд, ки AED колити захмдорро дар одамон табобат мекунад, метавонад доруҳоро иваз кунад ё истифодаи дарозмуддати он бехатар аст.

1. Септуми чормағз чист?

Ҳангоми кушодани пӯсти сахти чормағз, дар дохил пардаи борики чӯбинмонанде мавҷуд аст, ки лобаҳои мағзро аз ҳам ҷудо мекунад. Дар адабиёти илмӣ ин сохтор Diaphragma Juglandis Fructus номида мешавад. DJF-и дар таҳқиқот истифодашуда аз Juglans regia L. гирифта шудааст.

DJF дар занҷири коркарди ғизо ва чормағз аксаран ҳамчун маҳсулоти иловагии арзиши паст арзёбӣ мешавад. Равиши таҳқиқот ҷудо кардани ҷузъҳои дар об ҳалшаванда аз ин маҳсулоти иловагӣ ва омӯхтани хусусиятҳои биологии онҳост.

2. AED дақиқан чист?

AED ихтисораи ибораи англисии aqueous extract of Diaphragma Juglandis Fructus мебошад. Ба тоҷикӣ онро метавон “экстракти обии DJF” ё “экстракти обии септуми чормағз” гуфт.

AED як молекулаи ягонаи тозаи кимиёвӣ нест. Он экстракти мураккабест, ки якчанд ҷузъи кимиёвии дар об ҳалшаванда ё дар шароити экстраксия ба маҳлул гузарандаро дар бар мегирад. Аз ин рӯ, барои нисбат додани таъсири биологии AED ба як молекулаи муайян, ҷудокунии пайвастагиҳо ва таҷрибаҳои тасдиқи ҳадаф заруранд.

3. Экстракт чӣ гуна омода шудааст?

Муҳаққиқон 1000 g маводи хушкшудаи DJF-ро ба хока майда карда, 10 L оби дистиллшуда истифода бурданд. Таносуби сахт/моеъ 1:10 (w/v) муайян карда шуд.

1. 1000 g DJF-и хушк майда карда шуд.
2. 10 L оби дистиллшуда илова гардид.
3. Суспензия дар 25 °C барои 2 соат омехта шуд.
4. Сипас дар 100 °C барои 1 соат экстраксияи рефлюкс анҷом дода шуд.
5. Моддаҳои ҳалнашаванда бо филтратсияи вакуумӣ ҷудо карда шуданд.
6. Филтрат дар 40 °C таҳти фишори паст тақрибан то 200 mL ғализ карда шуд.
7. Сентрифугакунӣ анҷом дода шуд.
8. Намуна дар −70 °C барои 6 соат зуд ях карда шуд.
9. Дар −50 °C барои 48 соат лиофилизатсия карда шуд.
10. AED-и хушк дар зарфҳои герметикии қаҳваранг дар 4 °C нигоҳ дошта шуд.

Ҳосили экстраксия дар таҳқиқот тақрибан %9 гузориш шудааст. Ин нишондиҳанда маънои онро надорад, ки тамоми маводи хушки ибтидоӣ пайвастагии фаъол буд; он танҳо миқдори экстракти хушкеро ифода мекунад, ки пас аз тартиби истифодашудаи экстраксия ва хушккунӣ ба даст омад.

4. Профили кимиёвӣ чӣ гуна омӯхта шуд?

Таркиби кимиёвии AED бо усулҳои асосёфта ба масс-спектрометрия омӯхта шуд. Дар бахшҳои усул ва натиҷаҳои таҳқиқот аз таҳлили маркерӣ бо UPLC-MS/MS ва профилсозии кимиёвии бе ҳадаф бо LC-QTOF-MS ёд мешавад.

Дар манбаъ 31 пайвастагӣ дар доираи сатҳи эътимоди MSI 2–3 ба таври эҳтимолӣ аннотатсия шудаанд. “Аннотатсияи эҳтимолӣ” маънои онро дорад, ки хусусиятҳои спектралии пайвастагӣ бо як ҳувияти муайяни кимиёвӣ мувофиқанд, аммо ҳамаи пайвастагиҳо дараҷаи якхелаи тасдиқи қатъии сохторӣ надоранд.

Аз ҷумлаи пайвастагиҳои дар манбаъ ҳамчун мисол зикршуда:

• quercitrin,
• C17-sphinganine,
• 6-methoxyflavonol,
• succinic acid,
• catechin

мебошанд. Ин рӯйхат маънои онро надорад, ки тамоми таркиби кимиёвии AED танҳо аз ҳамин панҷ молекула иборат аст.

5. Чаро ҳуҷайраҳои RAW264.7 истифода шуданд?

RAW264.7 хатти ҳуҷайраи макрофагии пайдоиши муш мебошад. Макрофагҳо ҳуҷайраҳое ҳастанд, ки дар системаи иммунӣ дар истеҳсол ва танзими сигналҳои илтиҳобӣ иштирок мекунанд.

Дар таҳқиқот ҳуҷайраҳои RAW264.7 бо липополисахарид (LPS) таҳрик дода шуданд. LPS ҷузъи муҳими мембранаи берунии бактерияҳои Gram-манфӣ буда, дар шароити лабораторӣ барои ба вуҷуд овардани ҷавоби пурқуввати илтиҳобӣ дар макрофагҳо васеъ истифода мешавад.

Аз ин рӯ, ин модел “ҳуҷайраи рӯдаи бемори колити захмдор” нест. Он модели содакардашудаи макрофагист, ки барои омӯзиши сигнализатсияи илтиҳобӣ дар муҳити назоратшавандаи ҳуҷайравӣ истифода мешавад.

6. Озмоиши зиндамонии ҳуҷайра

Ҳуҷайраҳои RAW264.7 бо зичии \(7 \times 10^3\) ҳуҷайра дар ҳар чоҳча ба пластинаҳои 96-чоҳча шинонда шуданд. Барои AED консентратсияҳои 0.1, 0.5, 1, 5, 10 ва 50 µg/mL дар тӯли 24 соат арзёбӣ шуданд.

Зиндамонии ҳуҷайра бо озмоиши CCK-8 ва ченкунии абсорбанс дар 450 nm омӯхта шуд. Матни асосии натиҷаҳо гузориш медиҳад, ки AED дар консентратсияҳои пасттар аз 10 µg/mL ситотоксикӣ нишон надод. Озмоишҳои асосии минбаъдаи илтиҳобӣ махсусан ба консентратсияҳои 1, 5 ва 10 µg/mL тамаркуз карданд.

7. Чаро NO, IL-6, IL-1β ва TNF-α чен карда шуданд?

Оксиди нитроген (NO) молекулаи хурди сигналист, ки ҳангоми илтиҳоб тавассути ферменти iNOS метавонад ба миқдори зиёд истеҳсол шавад. Дар таҳқиқот NO на ҳамчун гази мустақим, балки тавассути нитрит дар супернатанти культура бо усули Griess арзёбӣ шуд.

IL-6, IL-1β ва TNF-α ситокинҳои муҳими ҷавоби илтиҳобӣ мебошанд. Консентратсияи онҳо дар супернатанти культураи ҳуҷайра бо ELISA чен карда шуд.

Ҳуҷайраҳо пас аз 1 соат пешкоркард бо AED, бо 100 ng/mL LPS барои 24 соат таҳрик дода шуданд. LPS истеҳсоли ситокинҳоро зиёд кард, AED бошад дар таҳқиқоти манбаъ ин афзоишро коҳиш дод.

8. iNOS ва COX-2 чистанд?

iNOS синтазаи индуктсияшавандаи оксиди нитроген мебошад. Дар шароити ангезаҳои илтиҳобӣ метавонад ба синтези зиёди NO мусоидат кунад.

COX-2 ферменти циклооксигеназа-2 буда, ҳангоми илтиҳоб метавонад вобаста ба синтези простаноидҳо зиёд шавад.

Дар таҳқиқот таҳлили Western blot нишон дод, ки LPS сатҳҳои сафедаи iNOS ва COX-2-ро зиёд кардааст; истифодаи AED бошад ин афзоиши вобаста ба LPS-ро коҳиш додааст.

9. Роҳи сигналии JAK1/STAT3 чист?

JAK1 Janus kinase 1; STAT3 бошад сафедаи сигналист, ки signal transducer and activator of transcription 3 ном дорад. Фаъолшавии сафедаҳои JAK метавонад фосфорилшавии баъзе сафедаҳои STAT-ро дастгирӣ кунад; сафедаҳои фосфоршудаи STAT баъдан метавонанд дар равандҳои сигналии танзимкунандаи ифодаи ген иштирок кунанд.

Дар таҳқиқот JAK1 ва STAT3-и умумӣ ва шаклҳои фосфоршудаи онҳо алоҳида омӯхта шуданд. LPS сатҳҳои p-JAK1 ва p-STAT3-ро зиёд кард, дар ҳоле ки барои JAK1 ва STAT3-и умумӣ чунин афзоиши равшан гузориш нашуд.

AED таносубҳои p-JAK1/JAK1 ва p-STAT3/STAT3-ро нисбат ба гурӯҳи LPS коҳиш дод. Қавитарин фурӯнишонӣ дар манбаъ тақрибан дар 5 µg/mL гузориш шудааст.

Оё JAK1/STAT3 сабаби исботшудаи таъсири AED ба колит аст?

Не. Таҳқиқот байни фосфорилшавии JAK1/STAT3 ва истифодаи AED робитаи таҷрибавӣ нишон медиҳад; аммо азбаски муҳаққиқон ингибитсияи махсуси роҳ ё озмоишҳои rescue анҷом надодаанд, онҳо исбот накардаанд, ки JAK1/STAT3 механизми ҳатмии сабабии таъсири AED аст. Аз ин рӯ, ифодаи дуруст чунин аст: “таъсири AED бо коҳиши сигнализатсияи JAK1/STAT3 алоқаманд буд”.

10. Модели муши DSS чист?

Декстран сулфати натрий (DSS) моддаи кимиёвиест, ки барои ба вуҷуд овардани модели колити шадид дар ҳайвоноти таҷрибавӣ тавассути осеби эпителияи колон ва илтиҳоб истифода мешавад.

Модели DSS тамоми биологияи колити захмдори инсонро бозсозӣ намекунад. Ин модели таҷрибавист, ки барои омӯзиши баъзе хусусиятҳои илтиҳобӣ, эпителиалӣ ва гистопатологии бемории инсон истифода мешавад.

11. Тарҳи таҷрибаи муш

Ба таҳқиқот дар маҷмӯъ 50 муши наринаи C57BL/6-и 6–8 ҳафтаина бо вазни 18–20 g дохил карда шуданд. Мушҳо тасодуфан ба панҷ гурӯҳ тақсим шуданд ва дар ҳар гурӯҳ 10 муш буд.

DSS дар оби нӯшокӣ ҳафт рӯз дода шуд; SASP ё AED рӯзона як маротиба бо гаважи даҳонӣ истифода гардид. 10 муши ҳар гурӯҳ дар ду қафаси ҷудогона, дар ҳар қафас 5 муш, нигоҳ дошта шуданд.

Гуфта мешавад, ки арзёбии натиҷаҳо ва таҳлили додаҳо то ҳадди имкон бо нобиноӣ нисбат ба тақсимоти гурӯҳҳо анҷом дода шуд. Дар давоми таҷриба ҳодисаи номатлуби ғайричашмдошт рух надод ва барои ягон ҳайвон эвтаназияи бармаҳал лозим нашуд.

12. DAI чист?

Disease Activity Index (DAI) равиши арзёбист, ки дар таҷрибаи колити DSS барои пайгирии вазнинии беморӣ талафи вазни бадан, консистенсияи наҷосат ва хун дар наҷосатро якҷо истифода мекунад.

Дар манбаъ талафи вазни бадан чунин баҳогузорӣ шудааст:

• 0: талаф нест,
• 1: %1–5,
• 2: %5–10,
• 3: %10–20,
• 4: зиёда аз %20.

Консистенсияи наҷосат:

• 0: муқаррарӣ,
• 1: суст,
• 2: дарунравӣ.

Хун дар наҷосат:

• 0: нест,
• 1: дар сатҳи из,
• 2: миёна,
• 3: шадид.

Аммо дар ин ҷо як ҷузъиёти бисёр муҳими таҷрибавӣ вуҷуд дорад. Гарчанде вазни бадан барои ҳар муш алоҳида чен карда шуд, консистенсияи наҷосат ва хун дар наҷосат аз сабаби имконнопазир будани нисбат додани наҷосат ба мушҳои алоҳида дар сатҳи қафас арзёбӣ шуданд. Аз ин рӯ, дар таҳлили DAI воҳиди таҷрибавӣ муш нест, қафас аст ва барои ҳар гурӯҳ танҳо n = 2 қафас мавҷуд аст.

Шарҳи Расми 2-и манбаъ натиҷаҳои DAI-ро “descriptive”, яъне тавсифӣ пешниҳод мекунад. Аз ин рӯ, тафсири каҷи DAI ҳамчун далели қавии омории ҳайвони инфиродӣ дуруст нест.

13. Дар мушҳо чӣ мушоҳида шуд?

Дар гурӯҳи DSS дар тӯли таҷриба талафи тадриҷии вазни бадан мушоҳида шуд. Истифодаи AED ва сулфасалазин дар таҳқиқоти манбаъ аз рӯзи 4 то рӯзи 7 бо коҳиши талафи вазн алоқаманд буд.

DSS ҳамчунин боиси кӯтоҳшавии колон гардид. Дар гурӯҳҳои табобат пешгирии қисмии кӯтоҳшавии колон гузориш шуд ва ҳифзи равшантарин дар гурӯҳи AED-и вояи 600 mg/kg мушоҳида гардид.

Дар арзёбии гистологӣ дар гурӯҳи DSS варами луобпарда, вайроншавии меъмории крипта ва инфилтратсияи ҳуҷайраҳои илтиҳобӣ дида шуд. Дар гурӯҳҳои AED ва сулфасалазин камшавии инфилтратсияи илтиҳобӣ ва ҳифзи беҳтари сохтори луобпарда нисбат ба гурӯҳи DSS гузориш гардид.

Азбаски ин натиҷаҳои гистологӣ ба тасвирҳои воқеии бофта асос ёфтаанд, дар Verianla “аксҳои гистологӣ”-и сунъӣ сохта нашудаанд.

14. Генҳои илтиҳобӣ дар бофтаи колон

Дар бофтаи колон сатҳҳои mRNA-и iNOS, IL-6, IL-1β ва TNF-α бо RT-qPCR чен карда шуданд. DSS сатҳи ҳамаи ин чор транскриптро нисбат ба гурӯҳи назорат баланд кард.

Истифодаи SASP ва AED афзоиши вобаста ба DSS-ро коҳиш дод; дар манбаъ қавитарин фурӯнишонӣ дар гурӯҳи AED-и вояи баланд гузориш шудааст.

RT-qPCR сатҳи mRNA-и генро чен мекунад. Коҳиши mRNA худ аз худ кафолат намедиҳад, ки сафедаи мувофиқ низ бо ҳамон таносуб коҳиш меёбад; равандҳое чун танзими баъдитранскрипсионӣ ва таҷзияи сафеда низ таъсир карда метавонанд.

15. Чаро ZO-1, occludin ва claudin-1 муҳиманд?

Пайвастагиҳои зич (tight junctions) байни ҳуҷайраҳои эпителиалии рӯда қисмҳои муҳими сохтори монеавӣ мебошанд, ки гузариши байниҳуҷайравиро маҳдуд мекунанд.

Дар таҳқиқот се сафедаи пайвастагӣ бо иммуногистохимия арзёбӣ шуданд:

• ZO-1: сафедаи адапторӣ, ки дар ташкили комплекси пайвастагӣ бо ситоскелети дохилиҳуҷайравӣ ва сафедаҳои мембрана нақш дорад,
• Occludin: яке аз ҷузъҳои трансмембранавии пайвастагии зич,
• Claudin-1: сафедаи оилаи claudin, ки дар муайян кардани хусусиятҳои монеаи параселлюлярӣ саҳм мегузорад.

Нисбат ба гурӯҳи DSS дар гурӯҳҳои SASP ва AED зиёдшавии шиддат ва пайвастагии рангкунӣ дар минтақаҳои пайвастагӣ гузориш шуд.

Дар ин ҷо ҳадди муҳими ченкунӣ вуҷуд дорад: гарчанде манбаъ аз тасвирҳои иммуногистохимиявӣ арзёбиҳои зичии миёнаи оптикиро пешниҳод мекунад, он равшан мегӯяд, ки инҳо ҳамчун ченкунии мустақими консентратсияи мутлақи сафеда истифода нашудаанд. Аз ин рӯ, хулосаи “миқдори сафеда дақиқан ҳамин қадар зиёд шуд” баровардан мумкин нест.

Оё таъсири AED дар ин таҳқиқот далели табобати колити захмдор дар одамон аст?

Не. Таҳқиқот далелҳои преклиникиро аз ҳуҷайраҳои RAW264.7 ва модели колити муши бо DSS ба вуҷудомада пешниҳод мекунад. Дар беморони инсонӣ ҷавоби клиникӣ, сатҳи ремиссия, вояи бехатар, ҳамкории доруҳо, биодастрасии меъдаву рӯда ё бехатарии дарозмуддат арзёбӣ нашудааст. Натиҷаҳоро мустақиман ба табобати инсон интиқол додан мумкин нест.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

16. Таҳлили транскриптомикӣ

Аз бофтаи дисталии колон RNA ҷудо карда шуд ва сифати RNA дар ҳудуди A260/280 = 1.9–2.1 тасдиқ гардид. Китобхонаҳои Poly(A)+ омода шуда, дар платформаи Illumina NovaSeq секвениркунии paired-end-и 150 ҷуфти асосӣ анҷом дода шуд.

Хонишҳои секвениркунӣ аз филтри сифат гузаронда шуда, ба геноми муш GRCm39, версияи Ensembl 104 бо STAR v2.7.10a ҳамоҳанг карда шуданд.

Ҳисобҳои ген бо featureCounts v2.0.3 сохта шуда, ифодаи дифференсиалии ген бо DESeq2 таҳлил гардид.

17. Log2 fold change чист?

Fold change таносуби ифодаи генро байни ду шароит нишон медиҳад. Намоиши логарифмӣ махсусан имкон медиҳад, ки афзоиш ва коҳиш дар миқёси мутавозинтар муқоиса шаванд.

Масалан:

• log2 FC = +1 → тақрибан 2 маротиба афзоиш,
• log2 FC = −1 → тақрибан то нисф коҳиш,
• log2 FC = 0 → аз ҷиҳати таносуб тағйирот нест

маъно дорад.

Дар бахши усули манбаъ барои генҳои дифференсиалӣ ифодашуда:

\[ |\log_2 FC| \geq 1.5 \]

ва

\[ p_{\mathrm{adjusted}} < 0.05 \]

ҳадҳо дода шудаанд.

Аммо дар шарҳи Расми 5-и манбаъ таърифи DEG ҳамчун |\(\log_2\)(fold change)| ≥ 1.0 ва adjusted p < 0.05 навишта шудааст. Ин ду ҳад дар дохили манбаъ фарқ мекунанд. Verianla ин фарқиятро хомӯшона ба як арзиш табдил намедиҳад.

18. Чаро p-и ислоҳшуда ва FDR истифода мешаванд?

Вақте ҳазорҳо ген ҳамзамон санҷида мешаванд, истифодаи танҳо p < 0.05 метавонад генҳои зиёдеро диҳад, ки тасодуфан муҳим менамоянд. Аз ин рӯ, муҳаққиқон бо усули Benjamini–Hochberg сатҳи кашфи бардурӯғ, яъне false discovery rate (FDR)-ро назорат карданд.

Дар манбаъ барои таҳлили генҳои дифференсиалӣ FDR < 0.05 ва барои таҳлилҳои ғанисозии функсионалӣ q < 0.05 истифода шудааст.

Манбаъ ҳамчунин фосилаи эътимоди %95 барои log2 fold change-ро бо сохтори зерин медиҳад:

\[ 95\%\,GA = \log_2 FC \pm 1.96 \times SE \]

Дар ин ҷо SE хатои стандартӣ аст. Коэффисиенти 1.96 барои сохтани фосилаи эътимоди дусамтаи тақрибан %95 дар доираи наздикшавии нормалии истифодашуда истифода мешавад.

19. Натиҷаҳои транскриптомикӣ

Таъсири DSS нисбат ба гурӯҳи назорат бо ҷамъ 125 гени дифференсиалӣ алоқаманд буд:

• 51 ген боло танзим шуд,
• 74 ген поён танзим шуд.

Дар муқоисаи дигари транскриптомикии вобаста ба HAED ҷамъ 563 DEG гузориш шуд:

• 294 боло танзим шуд,
• 269 поён танзим шуд.

Азбаски тарзи ифодаи гурӯҳи истинодии ин муқоисаи дуюм дар матни манбаъ ва пешниҳоди “subsequent AED treatment” дар Расми 5 пурра зери як нишонаи ягонаи равшан дода нашудааст, Verianla рақами 563-ро бо номи дақиқи муқоисае, ки дар манбаъ нест, аз нав тамғагузорӣ намекунад.

Таҳлилҳои ғанисозии функсионалӣ мавзӯъҳои вобаста ба илтиҳоб, матрикси берунҳуҷайравӣ ва равандҳои интиқолро пешбарӣ карданд. Тағйирот дар транскриптҳои вобаста ба бозсозии матрикс, аз ҷумла LOX, P4HA1, MMP2 ва MMP9, гузориш шуданд.

20. Ҳадафҳои номзад чӣ гуна пайдо шуданд?

Муҳаққиқон натиҷаҳои транскриптомикиро бо пешгӯиҳои ҳадаф барои молекулаҳои хурди дар AED ошкоршуда муттаҳид карданд.

Пойгоҳҳои PharmMapper, SwissTargetPrediction ва SEA истифода шуданд; ҳадафҳое нигоҳ дошта шуданд, ки ҳадди ақал аз ҷониби ду манбаи пешгӯӣ дастгирӣ мешуданд.

Дар ин ҳамгироӣ 553 гени эҳтимолии бо AED ҳамкоркунанда муайян шуд ва 22-тои онҳо бо маҷмӯи DEG-и боло танзимшудаи вобаста ба AED ҳампӯшӣ доштанд.

Дар таҳлили шабакаи ҳамкории сафеда–сафеда ACE, APOB, IGF1 ва VWF дар байни гиреҳҳои дорои пайвастагии баланд буданд.

Аммо “дар шабака пайвастагии баланд доштан” исбот намекунад, ки молекула воқеан ҳадафи ҳатмии интиқолдиҳандаи таъсири биологии AED аст.

21. ACE ва VWF чӣ маъно доранд?

ACE, angiotensin-converting enzyme, ферментест, ки дар коркарди пептидҳои гуногун иштирок мекунад.

VWF, von Willebrand factor, гликопротеини калонест, ки махсусан бо гемостаз ва биологияи рагҳо алоқаманд аст.

Дар ин таҳқиқот ACE ва VWF бо таҷрибаҳои мустақими биохимиявии тасдиқи ҳадаф исбот нашудаанд. Онҳо бар асоси таҳлили шабакавӣ, пешгӯии ҳадаф аз адабиёт ва docking-и молекулавӣ ҳамчун ҳадафҳои номзади барои таҳқиқоти минбаъда интихоб шудаанд.

22. Docking-и молекулавӣ чӣ гуна анҷом дода шуд?

Барои ACE сохтори кристалии PDB: 3L3N ва барои VWF сохтори PDB: 3HXQ истифода шуданд. Сохторҳои сафеда бо UCSF Chimera v1.17 омода шуданд; ҷузъҳои ғайрисафеда хориҷ ва гидрогенҳо илова карда шуданд.

Сохторҳои лиганд аз PubChem гирифта шуда, бо MMFF94 оптимизатсия ва бо Open Babel v3.1.1 ба формати PDBQT табдил дода шуданд.

Docking бо AutoDock 4.2.6 анҷом дода шуд. Барои ҳар лиганд бо истифода аз Lamarckian Genetic Algorithm 50 иҷрои docking анҷом дода шуд ва конформатсияи дорои пасттарин энергияи пешбинишудаи пайвастшавӣ барои таҳлили ҳамкорӣ интихоб гардид.

Дар баъзе ҷуфтҳои лиганд–ҳадаф гузориш шудааст, ки скори ҳисобшудаи docking аз −10 kcal/mol пасттар будааст.

Lancerotoxin A ва C17-Sphinganine ҳамчун пайвастагиҳои намоянда барои визуализатсияи муфассали ҳамкориҳои онҳо бо ACE интихоб шуданд.

Скори docking константаи таҷрибавии пайвастшавӣ нест. Скори манфитар нишон медиҳад, ки дар функсияи энергетикии модели истифодашуда позаи мусоидтар пешгӯӣ шудааст; он худ аз худ пайвастшавии воқеии ҳуҷайравиро исбот намекунад.

23. Симулятсияи динамикаи молекулавӣ

Симулятсияҳои динамикаи молекулавӣ бо истифода аз GROMACS v2023.2 анҷом дода шуданд.

RMSD барои арзёбии каҷравии умумии геометрии сохтор аз конформатсияи истинод кӯмак мекунад.

RMSF ҳаракатнокии боқимондаҳои алоҳидаи аминокислотаҳоро дар тӯли симулятсия арзёбӣ мекунад.

Rg ё radius of gyration бузургиест, ки ба дараҷаи компакт будани тақсимоти сохтори молекулавӣ нисбат ба маркази масса алоқаманд аст.

Пуршавии пайванди гидрогенӣ нишон медиҳад, ки меъёри муайяни пайванди гидрогенӣ дар чӣ қисми траектория иҷро шудааст.

Комплексҳои ACE–Lancerotoxin A ва ACE–C17-Sphinganine дар симулятсияи 200 ns бо ACE алоқаманд боқӣ монданд. Манбаъ гузориш медиҳад, ки комплекси Lancerotoxin A нисбат ба комплекси C17-Sphinganine тағйирёбии сохтории камтар ва пайвандҳои гидрогении устувортар нишон дод.

Ин маънои онро надорад, ки Lancerotoxin A дар организми зинда ACE-ро ба таври тасдиқшуда ингибитсия мекунад. Ин рафтори молекулавии ҳисобшударо дар доираи сохторҳои ибтидоӣ ва майдони қувваи симулятсия ифода мекунад.

24. MM/PBSA ва сканкунии аланин

Дар манбаъ равиши MM/PBSA барои арзёбии ҷузъҳои ҳисоббарории энергияи ҳамкории лиганд–сафеда аз траекторияҳои динамикаи молекулавӣ истифода шудааст.

Ихтисораи MM/PBSA дар маҷмӯъ ба равиши Molecular Mechanics / Poisson–Boltzmann Surface Area ишора мекунад.

Дар сканкунии ҳисоббарории аланин баъзе занҷирҳои паҳлуии аминокислота дар модель бо аланин иваз карда мешаванд ва тағйироти пешбинишудаи энергияи пайвастшавӣ омӯхта мешавад. Ҳадаф муайян кардани боқимондаҳои “hot-spot” мебошад, ки метавонанд ба пайвастшавӣ саҳми бештар гузоранд.

Дар манбаъ ҳамчун боқимондаҳои умумии номзади hot-spot барои ду комплекс:

• Trp357,
• Ser355,
• Val518,
• Glu143

гузориш шудаанд. Дар байни онҳо Trp357 пас аз ивазкунии аланин бузургтарин таъсири пешбинишудаи ноустуворкунанда нишон додааст.

Азбаски ин боқимондаҳо бо мутагенези таҷрибавӣ тасдиқ нашудаанд, набояд ҳамчун “нуқтаҳои қатъии пайвастшавии ACE барои AED” пешниҳод шаванд.

25. Таҳлили метаболомикӣ

Дар намунаҳои колон таҳлили метаболомикии LC-MS-и бе ҳадаф анҷом дода шуд. Намунаҳои назорати сифат дар фосилаҳои мунтазам ворид карда шуданд; хусусиятҳое, ки QC-и каҷравии стандартии нисбӣ аз %30 баланд доштанд ё дар намунаҳои blank ошкор шуданд, хориҷ карда шуданд.

Додаҳо:

1. нормализатсия шуданд,
2. ба табдили \(\log_2\) дучор шуданд,
3. миқёсбандии Pareto татбиқ гардид.

Дар манбаъ барои интихоби метаболитҳои дифференсиалӣ равиши q < 0.05 бо ислоҳи FDR шарҳ дода мешавад, дар бахши натиҷаҳо бошад ҳамчунин маҷмӯи 39 метаболит бо меъёрҳои VIP > 1 ва p < 0.05 гузориш шудааст.

26. Фарқи байни PCA ва PLS-DA

PCA, principal component analysis, усули беназорати камкунии андоза аст, ки бе истифодаи ҳатмии нишонаҳои гурӯҳӣ самтҳои асосии вариатсияи додаҳоро ҷамъбаст мекунад.

PLS-DA, partial least squares discriminant analysis, усули назоратшавандаест, ки бо истифодаи нишонаҳои маълуми синфӣ ҷудоии байни гурӯҳҳоро таъкид мекунад.

Дар таҳқиқот дар графики PCA гурӯҳҳои DSS ва назорат аз ҳам ҷудо шуданд; гурӯҳи AED мавқеи мобайниро байни ин ду гурӯҳ нишон дод. PLS-DA низ профилҳои метаболикии DSS ва назоратро ҷудо кард.

Азбаски PLS-DA назоратшаванда аст, ҷудоии хуби визуалии модел худ аз худ маънои қатъияти биологиро надорад. Аз ин рӯ, манбаъ мегӯяд, ки устувории модел бо тасдиқи салибӣ ва озмоиши пермутатсия арзёбӣ шудааст.

27. Натиҷаҳои метаболомикӣ

Дар маҷмӯъ 39 метаболит ба меъёрҳои скрининг ҷавобгӯ буданд ва 36-тои онҳо дар тартиби Назорат–DSS–AED намунаи самтноки “паст–баланд–паст” ё “баланд–паст–баланд”-ро нишон доданд.

Аз роҳҳои барҷастаи таҳлили ғанисозии KEGG:

• метаболизми таурин–гипотаурин,
• метаболизми аргинин–пролин,
• биосинтези гормонҳои стероидӣ,
• метаболизми глутатион,
• метаболизми нитроген

буданд.

Гипотаурин дар гурӯҳи DSS коҳиш ёфт ва пас аз AED зиёд шуд. Афзоиши спермин дар гурӯҳи DSS дар гурӯҳи AED заифтар гардид.

Дар як қатор эфир-глицерофосфолипидҳо, намудҳои LPI/LPC, phytosphingosine, ҳосилаҳои эйкозаноид ва гормонҳои стероидӣ низ тағйироти самтноки вобаста ба AED гузориш шуданд.

Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки роҳҳои метаболикӣ бо таъсири AED алоқаманданд; онҳо худ аз худ исбот намекунанд, ки метаболити муайян сабаби таъсири муҳофизатии AED аст.

28. Шабакаи коррелятсияи ген–метаболит

Дар таҳқиқот барои пайваст кардани додаҳои транскриптом ва метаболоми гурӯҳи DSS шабакаи коррелятсияи дуқисма ва бесамт сохта шуд.

Барои сохтани канор байни ген ва метаболит:

\[ |\rho| > 0.7 \]

ва

\[ p < 0.05 \]

шартҳо истифода шуданд.

Дар ин ҷо \(\rho\) коэффисиенти коррелятсияи дараҷавии Spearman аст.

Шабакаи сохташуда:

• 48 гиреҳ,
• 63 канор

дошт ва %65-и робитаҳо аз коррелятсияҳои мусбат иборат буданд.

29. Скори hub centrality

Дар манбаъ марказияти гиреҳ бо формулаи зерин якҷо карда шудааст:

\[ H=C_D+C_B \]

Дар ин ҷо:

• \(H\): скори муттаҳидаи hub centrality,
• \(C_D\): degree centrality,
• \(C_B\): betweenness centrality

таъриф шудаанд.

Degree centrality ба шумораи робитаҳои қавии як гиреҳ дар шабака; betweenness centrality бошад ба дараҷаи ҷойгиршавии он ҳамчун пайванди миёнарав дар роҳҳои байни дигар гиреҳҳои шабака алоқаманд аст.

Гиреҳҳое, ки арзишҳои \(H\)-и онҳо аз ҳадди персентилии %70-и ҳамаи гиреҳҳо болотар буданд, ҳамчун “hub” таъриф шуданд.

L-hydroxyproline ва dehydroepiandrosterone (DHEA) ҳамчун hub-ҳои муҳими метаболикӣ; Creb3l3 бошад ҳамчун марказитарин гиреҳи ген гузориш шуданд.

Марказият маънои зарурати биологиро надорад. Марказияти баланди як гиреҳи шабака худ аз худ исбот намекунад, ки он сабаби қатъии беморӣ ё ҳадафи табобат аст.

30. Таҳлили бисёр-омикии асосёфта ба SVD

Муҳаққиқон барои омӯзиши намунаҳои умумии вариатсияи сатҳи баланд байни транскриптом ва метаболом singular value decomposition (SVD)-ро истифода карданд.

Барои 50 метаболити аввал, ки аз метаболом бар асоси скори VIP интихоб шуданд:

\[ \log_2(x+1) \]

табдил татбиқ шуд.

Ҳадафи математикии илова кардани \(+1\) пешгирӣ аз номуайян шудани логарифм дар арзишҳои сифр аст.

Хусусиятҳои метаболит баъдан барои ҳар хусусият бо z-score нормализатсия шуданд. Ба ҳамин тартиб, 50 DEG-и аввал аз транскриптом низ нормализатсия шуданд.

Ҳар яке аз ду матритса:

\[ 5\ \text{örnek} \times 50\ \text{özellik} \]

андоза дорад.

Онҳо ба таври уфуқӣ якҷо карда шуда:

\[ 5 \times 100 \]

матритсаи ҳамгирошудаи чунин андоза сохта шуд.

Намоиши таълимии математикии SVD-и стандартӣ натиҷаи нави таҳқиқот нест, балки асоси усул аст:

\[ X \approx U\Sigma V^T \]

Дар ин ҷо \(X\) матритсаи ҳамгирошудаи додаҳоро, \(U\) компонентҳо дар фазои намунаҳоро, \(\Sigma\) арзишҳои сингулярӣ ва \(V^T\) сохтори саҳми хусусиятҳоро ба компонентҳо ифода мекунад.

Дар таҳқиқот бо scikit-learn TruncatedSVD:

• n_components = 3,
• random_state = 42

истифода шудааст.

Factor 2 %48.7-и вариатсияи умумиро шарҳ дод. Slc9a3 (NHE3) ва Retnlb арзишҳои баланди loading нишон дода, якҷо бо кислотаҳои равғании дароззанҷири бисёрсернашуда, аз ҷумла DHA, тағйир ёфтанд.

Азбаски матритсаи ҳамгирошудаи ин таҳлили SVD танҳо ба панҷ намуна асос ёфтааст, натиҷаҳо бояд на ҳамчун модели васеи аҳолӣ, балки ҳамчун сохтори умумии вариатсияи иктишофӣ тафсир шаванд.

31. Таҳлили оморӣ

Таҳлилҳои асосии оморӣ бо GraphPad Prism 9.5.1 анҷом дода шуданд.

Дар манбаъ:

• озмоиши Shapiro–Wilk барои санҷиши тақсимоти нормалӣ,
• озмоиши Levene барои якхелагии дисперсия,
• one-way ANOVA барои муқоисаҳои чандгурӯҳӣ,
• озмоиши Tukey post hoc дар дисперсияи якхела,
• озмоиши Dunnett T3 дар дисперсияи нобаробар,
• two-way repeated-measures ANOVA барои арзёбии вазни бадан бо омилҳои вақт

истифода шудаанд.

Ҳадди аҳамияти дусамта p < 0.05 муайян шудааст.

Гарчанде дар бахши усул барои DAI низ repeated-measures ANOVA зикр шудааст, азбаски воҳиди таҷрибавӣ қафас аст ва барои ҳар гурӯҳ танҳо n = 2 қафас мавҷуд аст, Расми 2-и манбаъ DAI-ро тавсифӣ пешниҳод мекунад. Аз ин рӯ, дар арзёбии Verianla барои DAI даъвои қавии инференсиалӣ карда намешавад.

32. Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ мекунад

• AED бо коҳиши истеҳсоли ситокинҳои проилтиҳобӣ дар ҳуҷайраҳои RAW264.7-и бо LPS таҳрикёфта алоқаманд аст.
• AED дар модели ҳуҷайравӣ бо коҳиши афзоиши iNOS ва COX-2 алоқаманд аст.
• AED бо коҳиши таносубҳои p-JAK1/JAK1 ва p-STAT3/STAT3 алоқаманд аст.
• 600 ва 200 mg/kg AED дар модели муши DSS бо беҳбудии баъзе нишондиҳандаҳои клиникӣ ва гистологии вобаста ба колит алоқаманд шуданд.
• Дар гурӯҳи AED-и вояи баланд нигоҳдории беҳтари дарозии колон нисбат ба гурӯҳи DSS гузориш шуд.
• Афзоиши mRNA-и iNOS, IL-6, IL-1β ва TNF-α дар бофтаи колон бо AED коҳиш ёфт.
• Дар намунаи иммуногистохимиявии пайвастагии ZO-1, occludin ва claudin-1 беҳбудӣ мушоҳида шуд.
• Натиҷаҳои транскриптомикӣ ва метаболомикӣ нишон доданд, ки истифодаи AED бо тағйироти вобаста ба роҳҳои илтиҳобӣ, интиқолӣ ва метаболикӣ ҳамроҳ буд.
• Роҳҳои метаболикии таурин–гипотаурин ва вобаста ба аргинин ҳамчун самтҳои муҳими механизми номзад пешбарӣ шуданд.
• ACE ва VWF ҳамчун ҳадафҳои номзад барои таҳлили ҳисоббарорӣ муайян шуданд.
• Lancerotoxin A ва C17-Sphinganine аз ҷиҳати ҳамкории эҳтимолӣ бо ACE ба таври муфассал бо усулҳои ҳисоббарорӣ омӯхта шуданд.

33. Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ намекунад

• Нишон дода нашудааст, ки AED колити захмдорро дар одамон табобат мекунад.
• Нишон дода нашудааст, ки AED метавонад ба ҷои доруҳои дорухатӣ истифода шавад.
• Вояҳои 200 ё 600 mg/kg барои мушро вояи инсон ҳисобидан мумкин нест.
• Исбот нашудааст, ки роҳи JAK1/STAT3 механизми қатъии сабабии таъсири AED аст.
• Исбот нашудааст, ки ACE ё VWF ҳадафи бевоситаи биологии тасдиқшудаи AED аст.
• Натиҷаҳои docking ё MD худ аз худ пайвастшавии воқеиро дар дохили ҳуҷайра тасдиқ намекунанд.
• Коррелятсияҳои метаболомикӣ исбот намекунанд, ки метаболитҳо сабаби мустақими таъсири муҳофизатӣ мебошанд.
• Таҳқиқот микробиотаи рӯдаро мустақиман секвенир накардааст.
• Гузарониши рӯда бо озмоиши функсионалии мустақими гузаронандагӣ чен карда нашудааст.
• Азбаски танҳо мушҳои нарина истифода шуданд, фарқиятҳои биологии зан/мард арзёбӣ нашуданд.
• Истифодаи дарозмуддат ва заҳролудӣ арзёбӣ нашуданд.
• Биодастрасӣ ва фармакокинетикаи инсонӣ чен карда нашуданд.

34. Ҷиҳати қавии илмии таҳқиқот

Яке аз ҷиҳатҳои муҳими таҳқиқот он аст, ки он танҳо ба як ченкунии биологӣ такя намекунад. Культураи ҳуҷайра, фенотипи ҳайвон, гистология, ифодаи ген, иммуногистохимия, транскриптомика, метаболомика, таҳлили шабакавӣ ва таҳлили сохтории ҳисоббарорӣ дар як чаҳорчӯбаи таҳқиқот баррасӣ шуданд.

Ин равиши бисёрқабата барои дидани он кӯмак мекунад, ки як падидаи биологӣ дар сатҳҳои гуногуни ченкунӣ дастгирӣ мешавад ё не.

Аммо ҳамсамт будани қабатҳои гуногуни додаҳо худкорона сабабият эҷод намекунад. Хусусан барои натиҷаҳои роҳ, метаболит ва ҳадафҳои номзад озмоишҳои дахолати функсионалӣ заруранд.

35. Дар таҳқиқоти оянда чӣ лозим аст?

Муаллифон пешниҳод мекунанд, ки дар оянда моделҳои аз ҷиҳати клиникӣ маънодортар истифода шаванд. Мисолҳо моделҳои ҳайвоноти инсонӣ ва органоидҳои рӯдаро дар бар мегиранд.

Илова бар ин:

• озмоишҳои ингибитсия/rescue барои JAK1/STAT3 ва дигар роҳҳои номзад,
• тасдиқи мустақими ҳадаф барои ACE ва VWF,
• ҷудокунии пайвастагиҳои фаъол,
• арзёбии истифодаи дарозмуддат ва бехатарӣ,
• омӯзиши рафтор дар матритсаи ғизо,
• таҳқиқоти фармакокинетикӣ ва биодастрасӣ пеш аз гузариш ба одамон,
• таҳқиқоти клиникии мувофиқ

лозим хоҳанд буд.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Унвони аслӣ: Walnut Septum-Derived Aqueous Extract Alleviates Colitis Through Modulation of Gut Metabolism and Inflammatory Signaling

Муаллифон: Beier Jiang, Yu Wan, Lina Liu, Jiajun Cheng, Tianjiao Min, Xinlong Gao, Zicheng Yu, Li Ma ва Ying He.

Саҳми баробар: Beier Jiang ва Yu Wan.

Муаллифони масъул: Li Ma ва Ying He.

Муассисаҳо: Navy Medical Centre, Naval Medical University, Shanghai 200433, China; College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China.

Маҷалла: Foods.

Ношир: MDPI.

Сабти библиографӣ: Foods 2026, 15(11), 1866.

DOI: 10.3390/foods15111866.

Санаи пешниҳод: 10 Март 2026.

Санаи ислоҳ: 30 Апрел 2026.

Санаи қабул: 18 Май 2026.

Санаи нашр: 25 Май 2026.

Пайванди расмӣ: https://doi.org/10.3390/foods15111866

Навъи манбаъ: Мақолаи аслии таҳқиқотӣ, ки дар маҷаллаи илмии тақризшуда нашр шудааст; таҳқиқоти преклиникӣ, ки таҳлилҳои ҳуҷайравӣ, ҳайвонӣ ва ҳисоббарориро муттаҳид мекунад.

Ҳолати preprint: Манбаи пешниҳодшуда мақолаи нашршудаи Version of Record мебошад. Дар PDF-и манбаъ версияи алоҳидаи preprint нишон дода нашудааст.

Литсензия: Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0).

Маблағгузорӣ: National Natural Science Foundation of China, рақами лоиҳа 82504587.

Тасдиқи ахлоқӣ: Таҷрибаҳои ҳайвонӣ аз ҷониби PLA Naval Medical Center Animal Experiments Committee тасдиқ шудаанд. Рақами тасдиқ 2025H007 аст.

Иштирокчии инсонӣ: Нест; informed consent татбиқ намешавад.

Дастрасии додаҳо: Муаллифон изҳор кардаанд, ки саҳмҳои аслӣ дар мақола ва маводи иловагӣ мавҷуданд ва дархостҳои иттилооти иловагӣ метавонанд ба муаллифони масъул ирсол шаванд.

Бархӯрди манфиатҳо: Муаллифон бархӯрди манфиатҳоро гузориш накардаанд.

Саҳмҳои муаллифон: Beier Jiang, Ying He ва Lina Liu дар консептуализатсия ва тарҳи таҳқиқот; Yu Wan ва Jiajun Cheng дар таҳлил ва тафсири додаҳои таҷрибавӣ; Tianjiao Min, Zicheng Yu ва Xinlong Gao дар таҷрибаҳои биологӣ ва таҳлили додаҳо саҳм гузоштаанд. Beier Jiang ва Yu Wan тарҳи аввалро навиштаанд; Li Ma ва Ying He бозбинии интиқодии мазмуни илмиро анҷом додаанд.

Ифодаи муҳими модел дар дохили манбаъ: Дар хулосаи мақола ибораи 10 µg/mL AED иштибоҳан дар дохили ҷумлаи модели муши DSS пайдо мешавад. Бахшҳои усул ва натиҷаҳо равшан нишон медиҳанд, ки сатҳи 10 µg/mL ба таҷрибаи ҳуҷайраи RAW264.7 тааллуқ дорад; вояҳои муш 200 ва 600 mg/kg мебошанд. Дар шарҳи Verianla сохтори таҷрибавии бахшҳои усул ва натиҷаҳо асос гирифта шудааст.

Ёддошти ҳадди транскриптомикӣ: Дар бахши усул меъёри DEG ҳамчун |log2 FC| ≥ 1.5 ва adjusted p < 0.05 навишта шудааст, дар шарҳи Расми 5 бошад |log2(fold change)| ≥ 1.0 ва adjusted p < 0.05. Ин фарқи дохилиманбаъӣ ҳамчун ҳалшуда нишон дода нашудааст.

Ёддошти DAI: Азбаски консистенсияи наҷосат ва хун дар наҷосат ба ҳайвонҳои алоҳида нисбат дода намешаванд, воҳиди таҷрибавии DAI қафас аст ва барои ҳар гурӯҳ танҳо ду қафас мавҷуд аст. Шарҳи Расми 2-и манбаъ DAI-ро тавсифӣ пешниҳод мекунад.

Ёддошт дар бораи сафедаҳои пайвастагии зич: ZO-1, occludin ва claudin-1 бо иммуногистохимия арзёбӣ шуда, дар тасвирҳо муқоисаи зичии миёнаи оптикӣ анҷом дода шудааст. Бо вуҷуди ин, муаллифони манбаъ махсус таъкид мекунанд, ки ифодаи мутлақи сафеда ба таври миқдорӣ чен карда нашудааст. Аз ин рӯ, натиҷаи IHC ҳамчун миқдори мутлақи сафеда мустақиман пешниҳод нашудааст.

Ёддошти сабабият: Азбаски ингибитсияи роҳи JAK1/STAT3 ё озмоиши rescue анҷом дода нашудааст, исбот нашудааст, ки ин роҳ сабаби қатъии таъсири AED аст. Робитаҳои транскриптом–метаболом низ худ аз худ меҳвари сабабии метаболизм–JAK1/STAT3–монеаро исбот намекунанд.

Ёддошти ACE/VWF: ACE ва VWF ҳадафҳои пешакии номзаданд, ки аз таҳлили шабакавӣ ва скрининги ҳисоббарорӣ ба даст омадаанд. Тасдиқи таҷрибавии функсионалии ҳадаф анҷом дода нашудааст.

Ёддошти мувофиқати истинодҳои манбаъ: Дар бахши муҳокимаи PDF унвонҳои библиографии баъзе истинодҳои рақамдор бо ҷумлаҳои атрофи онҳо ба таври намоён мувофиқат намекунанд. Масалан, сабти 53 дар бораи cerebral palsy ва сабти 54 дар бораи ҷарроҳии транспозитсияи артерияҳои калон аст. Матни Verianla бар асоси ин номувофиқиҳои библиографии намоён даъвои нави механизмиеро эҷод накардааст.