Полифенолҳои пӯсти анор (Pomegranate Peel Polyphenols, PPPs) омехтаи биоактивие мебошанд, ки аз пайвастагиҳои полифенолии вобаста ба маҳсулоти иловагии коркарди анор иборат буда, дар ин таҳқиқот ҳамчун препарати тиҷоратӣ бо тозагии зиёда аз %90 истифода шудаанд. Таҳқиқотчиён таркиби химиявии PPPs-ро бо LC–MS/MS тавсиф карда, фаъолияти онҳоро бо санҷишҳои антиоксидантии бе ҳуҷайра омӯхта, таъсири ситопротективиро дар ҳуҷайраҳои HepG2, ки бо H₂O₂ осеби оксидативӣ дидаанд, арзёбӣ намуда, сипас дар модели хастагии вобаста ба машқ бо 90 муши наринаи ICR дозҳои 25, 50 ва 100 mg/kg вазни бадан/рӯзро дар давоми 28 рӯз санҷидаанд. Таҳқиқот инчунин сафедаҳои вобаста ба Keap1/Nrf2 ва AMPK/PGC-1α/PPAR-α-ро бо Western blot омӯхта ва таъсири мутақобилаи эҳтимолии чор пайвастагии интихобшударо бо Keap1 ва AMPKα тавассути молекулярии docking арзёбӣ кардааст.

Дар арзёбии LC–MS/MS матни манбаъ мегӯяд, ки 20 пайвастагии асосӣ муайян шудааст; аммо дар Ҷадвали 1-и PDF ба таври намоён 19 сатри пайвастагӣ мавҷуд аст. Дар байни онҳо кислотаи галлӣ, эпикатехин, кислотаи кофеӣ, проантоцианидин B2, кислотаи протокатехӣ, кислотаи ферулӣ, кверцетин, каемпферол, изорамнетин ва гликозидҳои гуногуни флавоноидӣ ҳастанд. Муаллифон бо такя ба адабиёти қаблӣ махсусан кверцетин, кислотаи кофеӣ, эпикатехин ва кислотаи галлиро ҳамчун номзадҳои асосие арзёбӣ кардаанд, ки метавонанд ба фаъолияти биологии PPPs саҳм гузоранд.

PPPs дар санҷишҳои бе ҳуҷайра дар диапазони 0,02–0,10 mg/mL аз рӯи безараргардонии радикалҳои DPPH, гидроксил ва супероксид, пешгирии пероксидшавии липидҳо ва қобилияти барқароркунии оҳан фаъолияти антиоксидантии вобаста ба доза нишон додаанд. Дар модели HepG2, 400 µM H₂O₂ қобилияти зиндамонии ҳуҷайраҳоро тақрибан то нисфи арзиши назоратӣ паст кардааст; пештабобат бо 10, 20 ва 40 µg/mL PPPs қобилияти зиндамонии ҳуҷайраҳоро зиёд ва осеби оксидативиро кам кардааст. Дозаи баландтарини ҳуҷайравӣ, яъне 40 µg/mL PPPs, дар муқоиса бо гурӯҳи H₂O₂ шиддати флуоресценсияи дохилиҳуҷайравии ROS-ро %65,43 кам карда, фаъолияти SOD, CAT ва GSH-Px-ро зиёд ва MDA-ро паст кардааст.

Дар мушҳо вақти шиноварӣ бо бор то хастагӣ дар назорати обгирифта 16,00 ± 3,34 дақиқа буд, дар ҳоле ки дар дозҳои 25, 50 ва 100 mg/kg PPPs мутаносибан ба 21,34 ± 3,92, 35,80 ± 5,30 ва 49,55 ± 16,80 дақиқа афзуд. 100 mg/kg PPPs нисбат ба модели машқ сатҳҳои BUN, кислотаи лактикӣ, аммиаки хун, LDH ва CK-ро мутаносибан %31,21, %23,79, %27,44, %37,62 ва %29,09 кам кардааст. Ҳамин дозаи баланд глюкозаи хун, гликогени мушак ва гликогени ҷигарро мутаносибан %63,77, %128,99 ва %100,39 зиёд кардааст.

Натиҷаҳои Western blot бо коҳиши Keap1; афзоиши Nrf2, NQO1 ва HO-1; инчунин баланд шудани сатҳҳои p-AMPK, PGC-1α, TFAM, CPT-1 ва PPAR-α пас аз истифодаи PPPs алоқаманданд. Бо вуҷуди ин, таҳқиқот собит накардааст, ки ин роҳҳо сабаби ҳатмии таъсири зиддихастагии PPPs мебошанд, зеро таҷрибаҳои генетикӣ ё фармакологии бастани роҳ гузаронда нашудаанд. Натиҷаҳои молекулярии docking низ далели таҷрибавии пайвастшавии мустақим ба ҳадаф нестанд, балки пешгӯиҳои компютерии таъсирҳои мутақобилаи эҳтимолии молекулавӣ мебошанд.

Таҳқиқот дар одамон гузаронида нашудааст. Дозаи эквивалентии инсон, биодастрасии даҳонӣ, метаболитҳои фаъол, тақсимшавӣ дар бофтаҳо, бехатарии дарозмуддат, самаранокии клиникӣ ва интиқолпазирӣ ба натиҷаҳои воқеии варзишӣ муайян нашудаанд. Илова бар ин, ҳуҷайраҳои HepG2-и истифодашуда ҳуҷайраҳои карсиномаи гепатоселлюлярии инсон мебошанд ва физиологияи машқии мушаки скелетиро мустақиман намояндагӣ намекунанд.

Чаро пӯсти анор таҳқиқ шудааст?

Ҳангоми коркарди анор (Punica granatum L.) қисми пӯст одатан ҳамчун маҳсулоти иловагии кишоварзӣ-ғизоӣ ба вуҷуд меояд. Пӯсти анор аз пайвастагиҳои гуногуни полифенолӣ, аз ҷумла флавоноидҳо, кислотаҳои фенолӣ, антоцианинҳо ва таннинҳои гидролизшаванда бой аст. Азбаски стресси оксидативӣ яке аз ҷузъҳои муҳими биологии хастагии вобаста ба машқ аст, таҳқиқотчиён омӯхтаанд, ки оё қобилияти антиоксидантии полифенолҳои пӯсти анор бо нишондиҳандаҳои хастагии ҷисмонӣ алоқаманд аст ё не.

Дар таҳқиқот як ҷузъиёти муҳими методологӣ вуҷуд дорад: таҳқиқотчиён пӯсти анорро ҷамъ карда, раванди экстраксияи худро таҳия накардаанд. PPPs-и истифодашуда препарати тиҷоратии полифенолӣ бо тозагии зиёда аз %90 мебошад, ки аз Shanxi Jinrun Biotechnology Co., Ltd. гирифта шудааст. Таҳқиқотчиён миқдори умумии полифенолро бо усули Folin–Ciocalteu ва стандарти кислотаи галлӣ дубора тасдиқ карда, дар се партияҳои мустақил сифати муттасил ба даст омадааст, хабар додаанд.

Хастагӣ дар кадом чаҳорчӯбаҳои биологӣ баррасӣ шуд?

Таҳқиқоти манбаъ хастагии вобаста ба машқро бо як механизми ягона шарҳ намедиҳад. Таҳқиқотчиён се чаҳорчӯбаи асосиро якҷоя баррасӣ мекунанд: ҷамъшавии маҳсулоти иловагии метаболикӣ, камшавии захираҳои энергия ва стресси оксидативӣ.

Ҳангоми машқи шадид маҳсулоти метаболикӣ ба монанди кислотаи лактикӣ, нитрогени мочевинаи хун ва аммиак метавонанд зиёд шаванд. Сарф шудани гликогени мушак ва ҷигар метавонад дастрасии энергияро маҳдуд кунад. Ҳамзамон, агар истеҳсоли намудҳои реактивии оксиген аз қобилияти дифои антиоксидантӣ зиёд шавад, осеби оксидативӣ дар липидҳо, сафедаҳо ва дигар ҷузъҳои ҳуҷайравӣ афзоиш ёфта метавонад.

Аз ин рӯ, таҳқиқот танҳо вақти шиновариро чен накардааст; метаболитҳои сарысавӣ, глюкозаи хун, гликогени мушак ва ҷигар, фаъолияти ATPазаҳо, нишондиҳандаҳои стресси оксидативӣ, ситокинҳои илтиҳобӣ, сохтори гистологӣ ва сафедаҳои сигналии энергия/антиоксидантро ҳамзамон арзёбӣ кардааст.

Таҳлили LC–MS/MS дар PPPs чӣ нишон дод?

Профили химиявии PPPs бо истифода аз LC–MS/MS дар режими дугонаи ионизатсия бо системаи UHPLC-Q Exactive HF-X омӯхта шудааст. Андозаҳои сутуни ACQUITY UPLC HSS T3 100 mm × 2,1 mm ва андозаи зарра 1,8 µm мебошанд; ҳарорати сутун 40 °C, суръати ҷараёни фазаи ҳаракаткунанда 0,40 mL/дақиқа ва ҳаҷми тазриқ 3,0 µL муайян шудааст.

Диапазони сканкунии масс-спектрометрия m/z 70–1050 муқаррар шуда, ҳалнокии пурраи MS 60.000 ва ҳалнокии MS² 7500 истифода шудааст. Маълумоти хоми спектралӣ бо Progenesis QI 3.0 коркард шудааст.

Гарчанде матни манбаъ мегӯяд, ки “20 пайвастагии асосӣ” муайян шудааст, дар Ҷадвали 1-и нашршуда 19 сатри зерин дида мешавад. Пайвастагии дигаре, ки эҳтимолан намерасад, аз ҷониби Verianla тахмин карда нашудааст.

Ин ҷадвал нишон медиҳад, ки пайвастагиҳо дар PPPs муайян шудаанд; он консентратсияи миқдории ҳар як пайвастагиро дар препарат намедиҳад. Аз ин рӯ, масалан, аз ин ҷадвал хулоса баровардан мумкин нест, ки кверцетин бо фоизи муайян ҷузъи бартаридоштаи PPPs аст.

Чаро кверцетин, кислотаи кофеӣ, эпикатехин ва кислотаи галлӣ махсус интихоб шуданд?

Муаллифон ин чор пайвастагиро пас аз муайянкунии LC–MS/MS бинобар фаъолияти биологии антиоксидантӣ ва вобаста ба хастагӣ, ки дар адабиёти қаблӣ гузориш шудааст, ҳамчун ҷузъҳои эҳтимолии асосии фаъол интихоб кардаанд. Ин интихоб баъдан дар таҳлилҳои молекулярии docking барои Keap1 ва AMPKα низ истифода шудааст.

Бо вуҷуди ин, таҳқиқот ин чор молекуларо аз PPPs ҷудо карда, дар мушҳо алоҳида муқоиса накардааст. Аз ин рӯ, таҷрибавӣ муайян нашудааст, ки чӣ миқдор аз таъсирҳои мушоҳидашудаи PPPs ба кверцетин, кислотаи кофеӣ, эпикатехин ё кислотаи галлӣ алоҳида тааллуқ дорад.

Дар скрининги антиоксидантии бе ҳуҷайра чӣ ёфт шуд?

PPPs дар консентратсияҳои 0,02–0,10 mg/mL аз рӯи безараргардонии радикали DPPH, радикали гидроксил, аниони супероксид, фурӯнишонии пероксидшавии липидҳо ва қобилияти барқароркунии оҳан таҳқиқ шудаанд.

Дар ҳамаи панҷ санҷиш фаъолият умуман бо зиёд шудани консентратсия афзудааст. Манбаъ махсусан хабар медиҳад, ки дар сатҳи 0,06 mg/mL PPPs фаъолияти безараргардонии радикали DPPH ва ингибитсияи пероксидшавии липидҳо ба сатҳи муқоисашаванда бо кислотаи аскорбинӣ, ки ҳамчун назорати мусбат истифода шудааст, расидааст. Азбаски арзишҳои дақиқи хоми ҳамаи сутунҳои графикҳо дар матн дода нашудаанд, нуқтаҳои норасо аз ҷониби Verianla рақамӣ карда нашудаанд.

Модели осеби оксидативии HepG2 чӣ гуна сохта шуд?

HepG2 хатти ҳуҷайравии аз карсиномаи гепатоселлюлярии инсон ҳосилшуда мебошад. Таҳқиқотчиён ҳуҷайраҳоро дар DMEM бо %10 сарысуи феталии гов ва %1 пенисиллин-стрептомицин, дар 37 °C ва муҳити %5 CO₂ парвариш кардаанд.

Барои H₂O₂ консентратсияҳои 100, 150, 200, 250, 300, 350 ва 400 µM арзёбӣ шудаанд. 400 µM H₂O₂ ҳамчун модели осеби оксидативӣ интихоб шуд, зеро қобилияти зиндамонии ҳуҷайраҳоро тақрибан то %50-и назорат паст мекард.

Заҳролудии ҳуҷайравии танҳо PPPs дар диапазони 5–320 µg/mL санҷида шуд; дар сатҳҳои 5–80 µg/mL нисбат ба гурӯҳи назоратӣ ситотоксикии назаррас мушоҳида нашуд. Дар таҷрибаҳои минбаъдаи муҳофизатӣ 10, 20 ва 40 µg/mL PPPs истифода шуд; 40 µg/mL кислотаи аскорбинӣ ҳамчун назорати мусбат гирифта шуд.

Ҳуҷайраҳо пас аз 24 соати пештабобат бо PPPs бо 400 µM H₂O₂ барои 4 соат ангезиш дода шуданд.

Қобилияти зиндамонии ҳуҷайра чӣ гуна ҳисоб шуд?

Дар ченкунии CCK-8-и таҳқиқот қобилияти зиндамонии ҳуҷайра бо формулаи зерин ҳисоб шудааст:

Қобилияти зиндамонии ҳуҷайра (%) = (OD_sample / OD_control) × 100

OD_sample зичии оптикии гурӯҳи таҷрибавиро, ки дар 450 nm чен шудааст, ва OD_control зичии оптикии гурӯҳи назоратиро ифода мекунад. Наздик будани таносуб ба %100 сигнали метаболикии CCK-8-ро, ки ба гурӯҳи назоратӣ монанд аст, нишон медиҳад; арзиши пасттар ба сигнали мувофиқ бо қобилияти пасттари зиндамонии ҳуҷайра ишора мекунад.

PPPs ба стресси оксидативӣ дар ҳуҷайраҳои HepG2 чӣ гуна таъсир кард?

Истифодаи H₂O₂ флуоресценсияи дохилиҳуҷайравии ROS-ро баланд карда, фаъолияти SOD, CAT ва GSH-Px-ро коҳиш дода, MDA-ро ҳамчун нишондиҳандаи пероксидшавии липидҳо зиёд кардааст. PPPs ин тағйиротро вобаста ба консентратсия ба самти баръакс тағйир додааст.

Дозаи баландтарини ҳуҷайравӣ, яъне 40 µg/mL PPPs, нисбат ба гурӯҳи модели H₂O₂ шиддати нисбии флуоресценсияи ROS-ро %65,43 кам кардааст. Дар ҳамон доза фаъолияти SOD, CAT ва GSH-Px ба таври назаррас баланд ва MDA ба таври назаррас паст шудааст.

Дар Шакли 5-и манбаъ тасвирҳои воқеии микроскопияи флуоресцентии DCFH₂-DA мавҷуданд. Азбаски ин тасвирҳо мушоҳидаи мустақими таҷрибавӣ мебошанд, микроскопияи синтетикии ҳуҷайравӣ тавлид нашудааст.

Оё Полифенолҳои Пӯсти Анор Хастагии Вобаста ба Машқро Дар Мушҳо Кам Карданд?

Дар доираи ин модели таҷрибавӣ, ҳа: истифодаи 28-рӯзаи PPPs вақти шиновариро бо бор то хастагӣ вобаста ба доза зиёд карда, дар дозаи 100 mg/kg бисёр нишондиҳандаҳои хастагӣ, мубодилаи энергия, стресси оксидативӣ ва осеби бофтаро нисбат ба гурӯҳи модел беҳтар кардааст; аммо натиҷаҳо ба мушҳои наринаи ICR тааллуқ доранд ва самаранокии зиддихастагӣ ё дозаи мувофиқ дар одамон нишон дода нашудааст.

Чаро 90 муш ба ду шохаи алоҳидаи таҷрибавӣ тақсим шуданд?

Дар маҷмӯъ 90 муши наринаи ICR, 6-ҳафтаина ва вазнашон 22 ± 2 g истифода шуданд. Ҳайвонҳо дар 23 ± 2 °C, намии нисбии %45 ± 5 ва давраи 12 соат рӯшноӣ/12 соат торикӣ нигоҳ дошта шуданд. Пас аз як ҳафтаи мутобиқшавӣ ду шохаи асосии таҷрибавӣ ташкил шуд.

Гурӯҳи A барои ченкунии мустақими тобоварӣ ба машқ истифода шуд. Дар чор зергурӯҳ даҳтоӣ муш буданд: назорати обгирифта, 25 mg/kg PPPs, 50 mg/kg PPPs ва 100 mg/kg PPPs. Истифода дар давоми 28 рӯз ҳар рӯз як маротиба бо гаважи даҳонӣ анҷом дода шуд.

Гурӯҳи B барои таҳлили хун ва бофта истифода шуд. Дар панҷ зергурӯҳ даҳтоӣ муш буданд: назорати муқаррарии бидуни шиноварӣ, модели шиноварии обгирифта ва гурӯҳҳои шиноварӣ бо 25, 50 ё 100 mg/kg PPPs. Мушҳои ин шоха пас аз 30 дақиқа шиноварӣ барои таҳқиқоти биохимиявӣ ва гистологӣ гирифта шуданд.

Санҷиши шиноварӣ бо бор чӣ гуна гузаронда шуд?

30 дақиқа пас аз гаважи охирин ба думи мушҳои Гурӯҳи A бори сурбие баста шуд, ки ба %5 вазни бадани худи онҳо баробар буд. Мушҳо дар оби ҳарораташ 25 °C ва чуқуриаш 30 cm алоҳида шинонда шуданд. Об пайваста ҳаракат дода шуд, то мушҳо дар рӯйи об истироҳат ё ба таври ғайрифаъол шинокунӣ карда натавонанд.

Хастагӣ вақте рухдода ҳисоб шуд, ки муш пас аз зери об мондан дар давоми 8 сония барои нафаскашӣ ба рӯйи об баромада натавонист. Вақт аз оғоз то ин нуқта ҳамчун вақти шиноварӣ то хастагӣ сабт шуд.

Фарқ дар гурӯҳҳои дозаи миёна ва баланд дар манбаъ ҳамчун p < 0,01 гузориш шудааст. Натиҷаҳо тамоюли зиёд шудани вақти шиновариро бо афзоиши доза нишон медиҳанд. Аммо инҳирофи стандартии ±16,80 дақиқа дар гурӯҳи дозаи баланд инчунин нишон медиҳад, ки байни ҳайвонҳои ҳамон гурӯҳ тағйирпазирии назаррас вуҷуд дошт.

Оё вазни бадан ва индексҳои узвҳо тағйир ёфтанд?

Дар охири истифодаи 28-рӯза вазни бадан дар ҳамаи гурӯҳҳо бо афзоиши муқаррарӣ зиёд шуд. Байни гурӯҳҳои назоратӣ, модел ва PPPs аз рӯи афзоиши вазни бадан ё индексҳои ҷигар, гурда, сипурз ва тимус фарқи назаррас ёфт нашуд.

Индекси узв дар манбаъ бо формулаи зерин ҳисоб шудааст:

Индекси узв (%) = (Вазни узв / Вазни бадани муш) × 100

Набудани тағйири назаррас дар ин ченкуниҳо маънои санҷиши ҳамаҷонибаи бехатариро надорад. Таҳқиқот таҷрибаи 28-рӯзаи муш буда, барои токсикология, токсикияти репродуктивӣ, истифодаи музмин ва бехатарии инсон тарҳрезӣ нашудааст.

Нишондиҳандаҳои хастагӣ дар сарысу

Пас аз 30 дақиқа шиноварӣ BUN, кислотаи лактикӣ (LA), аммиаки хун (BA), лактатдегидрогеназа (LDH) ва креатинкиназа (CK) дар гурӯҳи модел нисбат ба гурӯҳи назоратӣ баланд шуданд. PPPs ин нишондиҳандаҳоро вобаста ба доза кам кард.

Кам шудани ин нишондиҳандаҳо бо сатҳи пасттари стресси метаболикӣ ва бофта пас аз шиноварӣ мувофиқ аст; аммо ҳар як биомаркер ба танҳоӣ санҷиши махсусе нест, ки “миқдори хастагӣ”-ро мустақиман чен кунад.

Захираҳои энергия чӣ гуна тағйир ёфтанд?

Дар мушҳои модел глюкозаи хун (BG), гликогени мушак (MG) ва гликогени ҷигар (LG) нисбат ба гурӯҳи назорати муқаррарӣ пасттар буданд. PPPs ин се нишондиҳандаро вобаста ба доза зиёд кард.

Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки мушҳои PPPs гирифта пас аз 30 дақиқа шиноварӣ захираҳои ченшавандаи бештаре доштанд. Аммо таҳқиқот суръатҳои синтез ва таҷзияи гликогенро мустақиман бо изотоп ё таҳлили flux чен накардааст.

Чаро фаъолияти ATPазаҳо чен шуд?

Na⁺-K⁺-ATPаза ва Ca²⁺-Mg²⁺-ATPаза ферментҳои мембранавӣ мебошанд, ки барои нигоҳ доштани градиентҳои ионӣ аз энергияи ATP истифода мебаранд. T-ATPаза бошад ченкунии фаъолияти умумии ATPаза бар асоси кит дар таҳқиқот мебошад. Дар модели машқи шадид ин фаъолиятҳо дар мушак ва ҷигар кам шуда, бо истифодаи PPPs барқарор шудаанд.

Гистологияи ҷигар ва мушак

Дар рангкунии H&E, дар ҷигари назорати муқаррарӣ кордҳои гепатикӣ ва синусоидҳо муназзам буданд, дар ҳоле ки дар модели машқ номуназзамии кордҳои гепатикӣ, синусоидҳои васеъ ва норавшан ва инфилтратсияи сабуки ҳуҷайраҳои илтиҳобӣ мушоҳида шуд. Бо PPPs ин тағйирот вобаста ба доза сабук шуданд; манбаъ гузориш додааст, ки дар дозаи баланд сохтори ҷигар ба ҳолати муқаррарӣ наздик буд.

Дар мушаки гастрокнемиус гурӯҳи модел номуназзамии нахҳои мушак ва осеби бофтаро нишон дод ва гузориш шуд, ки бо истифодаи PPPs осеби нахҳо кам шудааст. Азбаски Шакли 6-и манбаъ микрографҳои воқеии H&E дорад, нусхаи сунъии онҳо тавлид нашудааст.

Стресси оксидативӣ ва илтиҳоб

Модели машқ фаъолияти SOD ва GSH-Px-ро дар бофтаҳои мушак ва ҷигар кам карда, MDA-ро баланд намуд. Дар гурӯҳи 100 mg/kg PPPs фаъолияти SOD ва GSH-Px ба сатҳҳои наздик ба муқаррарӣ баргашт ва MDA ба таври назаррас кам шуд.

Дар ҳамин модел IL-6, IL-1β ва TNF-α дар мушак ва ҷигар баланд шуданд. Истифодаи PPPs ин нишондиҳандаҳои илтиҳобиро кам кард. Азбаски манбаъ арзишҳои дақиқи ҳамаи сутунҳои графикҳоро дар матн намедиҳад, Verianla барои ин нишондиҳандаҳо танҳо самти омориро баён мекунад.

Оё Нақши Роҳҳои Keap1/Nrf2 ва AMPK/PGC-1α/PPAR-α Дар Таъсири PPPs Исбот Шуд?

Таҳқиқот робитаи қавиро бо ин роҳҳо нишон медиҳад, аммо сабабияти мустақимро исбот намекунад: PPPs дар ҷигари муш Keap1-ро кам ва Nrf2, NQO1 ва HO-1-ро зиёд карда, сатҳҳои p-AMPK, PGC-1α, TFAM, CPT-1 ва PPAR-α-ро баланд кардааст; аммо азбаски ингибитори роҳ, хомӯшкунии ген ё таҷрибаи талафоти генетикӣ истифода нашудааст, нишон дода нашудааст, ки ин тағйирот сабаби ҳатмии таъсири зиддихастагӣ мебошанд.

Меҳвари Keap1/Nrf2 чиро ифода мекунад?

Меҳвари Keap1/Nrf2 системаи муҳими танзимкунанда дар ҷавоби ҳуҷайра ба стресси оксидативӣ мебошад. Дар шароити муқаррарӣ Keap1 ба нигоҳ доштани Nrf2 таҳти назорат дар дохили ҳуҷайра мусоидат мекунад. Дар шароити стресси оксидативӣ фаъолшавии Nrf2 метавонад транскрипсияи генҳои вобаста ба унсури ҷавоби антиоксидантӣ (ARE)-ро зиёд кунад; NQO1 ва HO-1 аз сафедаҳои поёнҷараёни ин системаи дифоӣ мебошанд, ки дар таҳқиқоти манбаъ пайгирӣ шудаанд.

Модели шиноварӣ сафедаи Keap1-ро зиёд ва Nrf2, NQO1 ва HO-1-ро кам кардааст. PPPs ин тағйиротро ба самти баръакс танзим кардааст. Бо вуҷуди ин, Western blot танҳо ҳамбастагиро дар сатҳи сафеда нишон медиҳад. Гарчанде манбаъ дар муҳокима транслокатсияи ядроии Nrf2-ро зикр мекунад, дар бахши усул фраксиякунии мустақими ядро/ситоплазма ё тасвиркунии локализатсияи Nrf2 гузориш нашудааст; аз ин рӯ транслокатсияи ядроӣ набояд ҳамчун ченкунии мустақими алоҳида пешниҳод шавад.

Меҳвари AMPK/PGC-1α/PPAR-α чиро ифода мекунад?

AMPK протеинкиназае мебошад, ки ба ҳолати энергетикии ҳуҷайра ҳассос аст. Дар чаҳорчӯбаи механистии манбаъ, фаъолшавии AMPK метавонад дар робита бо PGC-1α биогенези митохондриявӣ ва мубодилаи энергияро дастгирӣ кунад. TFAM бо нигоҳдорӣ ва транскрипсияи ДНК-и митохондриявӣ; PPAR-α ва CPT-1 бошад бо истифодаи кислотаҳои равғанӣ ва β-оксидшавӣ алоқаманданд.

Дар модели шиноварӣ сафедаҳои p-AMPK, PGC-1α, TFAM, CPT-1 ва PPAR-α кам шуданд, дар гурӯҳҳои PPPs гирифта сатҳи ин сафедаҳо баланд шуд. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки меҳвари сигнали вобаста ба мубодилаи энергия ҳамроҳ бо истифодаи PPPs тағйир ёфтааст; аммо азбаски ингибитори AMPK ё дахолати генетикӣ истифода нашудааст, исбот нашудааст, ки занҷири сигнал барои таъсири зиддихастагӣ ҳатмӣ аст.

Молекулярии docking чиро санҷид?

Молекулярии docking усули in silico мебошад, ки ҳисоб мекунад молекулаи хурд дар кадом тартиби геометрӣ метавонад ба минтақаҳои муайяни сафедаи ҳадаф ҷойгир шавад ва модели компютерӣ барои ин ҷойгиршавӣ то чӣ андоза энергияи мусоиди пайвастшавиро пешгӯӣ мекунад. Дар ин таҳқиқот барои docking сохтори PDB 2FLU барои сафедаи Keap1 ва PDB 4CFF барои сафедаи AMPK истифода шудааст.

Сохторҳои сеандозаи молекулавии кверцетин, кислотаи кофеӣ, эпикатехин ва кислотаи галлӣ аз PubChem гирифта шуданд; docking бо AutoDock Vina 1.1.2 анҷом дода шуда, бо PyMOL 2.4.0 ва Discovery Studio 2019 визуалӣ карда шуд.

Энергияи бештар манфии docking дар доираи модели истифодашуда бо пайвастшавии мусоидтар пешгӯишуда мувофиқ аст. Кверцетин дар байни ин чор молекула ҳам барои Keap1 ва ҳам AMPKα энергияи аз ҳама манфии ҳисобшуда дорад.

Дар таҳлили Keap1 пешгӯӣ шуд, ки кверцетин, кислотаи кофеӣ ва эпикатехин метавонанд бо баъзе боқимондаҳои муҳими вобаста ба ҷайби P1 дар домени Kelch таъсири мутақобила дошта бошанд. Кислотаи галлӣ модели дигари таъсири мутақобиларо нишон дод.

Натиҷаи docking далели таҷрибавии пайвастшавии воқеии биологӣ ба сафеда нест. Азбаски кинетикаи пайвастшавӣ, ишғоли ҳадаф, консентратсияи ҳуҷайравӣ ва тасдиқи мустақими ҳадаф гузаронда нашудаанд, натиҷаҳои docking бояд танҳо ҳамчун пешгӯиҳои компютерӣ арзёбӣ шаванд, ки гипотезаи механистиро дастгирӣ мекунанд.

Монеаҳои асосӣ барои интиқоли натиҷаҳои таҳқиқот ба инсон

Табдил додани дозҳои 25, 50 ва 100 mg/kg/рӯз, ки дар мушҳо истифода шудаанд, ба инсон танҳо аз рӯи нисбати вазни бадан аз ҷиҳати илмӣ дуруст нест. Таҳқиқоти манбаъ дозаи эквивалентии инсонро ҳисоб накардааст ва таҷрибаи муайянкунии дозаи клиникиро анҷом надодааст.

Устувории PPPs дар системаи ҳозима, ҷаббиш аз рӯда, табдилёбӣ ба метаболитҳо, ҷузъҳои воқеан фаъоли гардишкунанда, миқдори ба бофтаҳои ҳадаф мерасида ва кинетикаи хориҷшавӣ муайян нашудаанд. Илова бар ин, истифодаи 28-рӯза дар муш бехатарии истифодаи музминро дар инсон нишон намедиҳад.

Хатти HepG2, ки дар марҳилаи ҳуҷайравии таҳқиқот истифода шуд, барои скрининги стресси оксидативӣ модели мувофиқ аст, аммо мушаки скелетиро, ки яке аз бофтаҳои марказии хастагии вобаста ба машқ аст, мустақиман намояндагӣ намекунад. Муаллифон барои оянда истифодаи моделҳои физиологитари мушак, ба монанди миотубҳои C2C12 ё ҳуҷайраҳои ибтидоии мушаки скелетиро тавсия медиҳанд.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Занҷири таҳқиқот

1. Препарати тиҷоратии PPPs бо тозагии зиёда аз %90 дастрас карда шуд ва миқдори умумии полифенол дар се партияҳои мустақил тасдиқ шуд.
2. Профили химиявии PPPs бо LC–MS/MS-и дуқутбӣ тавсиф карда шуд.
3. Бо 0,02–0,10 mg/mL PPPs якчанд санҷиши антиоксидантии бе ҳуҷайра гузаронда шуд.
4. Дар ҳуҷайраҳои HepG2 бо скрининги дозаи H₂O₂ модели осеби оксидативӣ сохта шуд.
5. Бо 10, 20 ва 40 µg/mL PPPs қобилияти зиндамонии ҳуҷайра, ROS, MDA, SOD, CAT ва GSH-Px арзёбӣ шуданд.
6. 90 муши наринаи ICR ба ду шохаи таҷрибавӣ тақсим шуда, дар давоми 28 рӯз 25, 50 ё 100 mg/kg/рӯз PPPs гирифтанд.
7. Дар Гурӯҳи A вақти шиноварӣ бо бор то хастагӣ чен карда шуд.
8. Дар Гурӯҳи B пас аз 30 дақиқа шиноварӣ биохимияи сарысу, ҷигар ва мушак ва гистология арзёбӣ шуданд.
9. Сафедаҳои вобаста ба Keap1/Nrf2 ва AMPK/PGC-1α/PPAR-α бо Western blot чен карда шуданд.
10. Чор полифеноли интихобшуда бо Keap1 ва AMPKα ба таҳлили молекулярии docking гирифта шуданд.

Гурӯҳҳои таҷрибаи ҳуҷайравӣ

Шароити асосии таҷрибаи муш

Ченкуниҳои биохимиявӣ

Дар сарысу кислотаи лактикӣ, BUN, глюкозаи хун, аммиаки хун, LDH ва CK чен карда шуданд. Дар бофтаҳои ҷигар ва мушак гликоген, MDA, SOD, GSH-Px, Na⁺-K⁺-ATPаза, Ca²⁺-Mg²⁺-ATPаза, T-ATPаза, IL-1β, IL-6 ва TNF-α арзёбӣ шуданд.

Бофтаҳои ҷигар ва мушак дар %4 параформальдегид фиксация, дар парафин ҷойгир ва дар буришҳои тақрибан 4 µm бо H&E ранг карда шуданд.

Усули Western blot

Сафедаҳои ҷигар бо буфери RIPA, ки ингибиторҳои протеаза ва фосфатазаро дошт, омода шуданд, миқдори сафеда бо усули BCA муайян ва намунаҳо дар гели %12 SDS-полиакриламид ҷудо шуданд. Сафедаҳо ба мембранаи PVDF гузаронда, бо антителаҳои аввалия ва дуюмия нишонгузорӣ ва бо ECL тасвир карда шуданд. Бандҳо бо системаи FluorChem FC3 ва барномаи AlphaView 6.0 таҳлил шуданд.

Сафедаҳои асосии омӯхташуда Keap1, Nrf2, NQO1, HO-1, p-AMPK, AMPK, TFAM, PGC-1α, PPAR-α ва CPT-1 мебошанд.

Таҳлили оморӣ

Маълумот ҳамчун миёна ± инҳирофи стандартӣ пешниҳод шудааст. Дар таҷрибаҳои ҳуҷайравӣ се такрори мустақили биологӣ (n = 3), дар таҷрибаҳои ҳайвонот бошад барои ҳар зергурӯҳ 10 муш (n = 10) истифода шуд.

Пеш аз омор муқаррарӣ будан ва якхелагии дисперсия санҷида шуд. Фарқҳои байни гурӯҳҳо бо таҳлили яксамтаи дисперсия (one-way ANOVA), сипас бо санҷиши муқоисаи сершумори Tukey арзёбӣ шуданд. Ҳадди аҳамиятнокӣ p < 0,05 мебошад.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот мустақиман дастгирӣ мекунад

• Препарати PPPs дар санҷишҳои антиоксидантии бе ҳуҷайра дар диапазони 0,02–0,10 mg/mL фаъолияти вобаста ба доза нишон дод.
• 400 µM H₂O₂ модели таҷрибавии осеби оксидативиро сохт, ки қобилияти зиндамонии ҳуҷайраҳои HepG2-ро тақрибан то %50 паст кард.
• 10–40 µg/mL PPPs қобилияти зиндамонии ҳуҷайраҳои HepG2-и бо H₂O₂ осебдидаро зиёд карда, ROS/MDA-ро кам ва фаъолияти ферментҳои антиоксидантиро зиёд кард.
• Истифодаи 28-рӯзаи PPPs вақти шиноварӣ бо борро дар мушҳо бо афзоиши доза дароз кард.
• 100 mg/kg PPPs дар модели шиноварӣ BUN, LA, BA, LDH ва CK-ро кам кард.
• 100 mg/kg PPPs глюкозаи хун, гликогени мушак ва гликогени ҷигарро нисбат ба гурӯҳи модел зиёд кард.
• PPPs коҳишҳои вобаста ба машқи фаъолияти ATPазаҳои мушак ва ҷигарро қисман баргардонд.
• PPPs бо тағйироте алоқаманд аст, ки нишондиҳандаҳои стресси оксидативӣ ва илтиҳобро дар мушак ва ҷигар коҳиш медиҳанд.
• Western blot нишон дод, ки PPPs бо тағйирот дар экспрессияи сафедаҳои вобаста ба Keap1/Nrf2 ва AMPK/PGC-1α/PPAR-α ҳамроҳ буд.
• Чор пайвастагии интихобшудаи PPP бо Keap1 ва AMPKα энергияҳои мусоиди ҳисобшудаи docking нишон доданд.

Хулосаҳое, ки таҳқиқот мустақиман дастгирӣ намекунад

• Нишон дода нашудааст, ки PPPs дар одамон хастагии музмин, хастагии машқ ё ягон бемории клиникиро табобат мекунад.
• Нишон дода нашудааст, ки дозҳои 25–100 mg/kg-и муш барои истифода дар одамон мувофиқанд.
• Нишон дода нашудааст, ки PPPs натиҷаҳои воқеии мусобиқа ё тамрини варзишгаронро беҳтар мекунад.
• Нишон дода нашудааст, ки кверцетин, кислотаи кофеӣ, эпикатехин ва кислотаи галлӣ танҳо масъули ҳамаи таъсирҳои PPPs мебошанд.
• Натиҷаҳои docking пайвастшавии воқеии ҳуҷайравиро бо Keap1 ё AMPK исбот намекунанд.
• Нишон дода нашудааст, ки роҳҳои Keap1/Nrf2 ё AMPK/PGC-1α/PPAR-α барои таъсири зиддихастагӣ ҳатмӣ мебошанд.
• Маълумоти Western blot ба танҳоӣ транслокатсияи мустақими ядроии Nrf2-ро исбот намекунад.
• Ҳуҷайраҳои HepG2 ҷойгузини физиологияи мушаки скелетӣ нестанд.
• Таҷрибаи 28-рӯзаи муш бехатарии дарозмуддати инсонро исбот намекунад.

Маҳдудиятҳои асосӣ

Маҳдудияти якуми муҳим он аст, ки PPPs омехтаи дақиқ муайяншудае нест, ки дар лаборатория аз пайвастагиҳои алоҳидаи стандартӣ омода шудааст, балки препарати тиҷоратии полифенолӣ мебошад. Гарчанде таҳқиқотчиён мутобиқати миқдори умумии полифенолро байни партияҳо тасдиқ кардаанд, миқдори мутлақи ҳар як пайвастагӣ дар препарат гузориш нашудааст.

Маҳдудияти дуюм он аст, ки матни манбаъ 20 пайвастагии асосиро гузориш мекунад, аммо дар Ҷадвали 1-и нашршуда ба таври намоён 19 сатри пайвастагӣ мавҷуд аст. Ин фарқ самти умумии натиҷаи таҷрибавиро тағйир намедиҳад, аммо дар гузориши тавсифи химиявӣ номувофиқии рақамии шарҳдоданашударо ба вуҷуд меорад.

Маҳдудияти сеюм ин аст, ки модели ҳуҷайра HepG2 мебошад. HepG2 метавонад барои скрининги осеби оксидативӣ истифода шавад, аммо биологияи мушаки скелетиро, ки дар маркази хастагии вобаста ба машқ аст, мустақиман модел намекунад.

Маҳдудияти чорум ин аст, ки натиҷаҳои сигналии механистӣ ба экспрессияи сафеда ва пешгӯиҳои docking асос ёфтаанд. Барои Keap1/Nrf2 ингибитор ё таҷрибаи талафоти генетикӣ, барои AMPK ингибитор ё таҷрибаи хомӯшкунӣ ва барои полифенолҳои интихобшуда санҷиши мустақими пайвастшавӣ ба ҳадаф гузаронда нашудааст.

Маҳдудияти панҷум номуайянии транслятсионӣ мебошад. Биодастрасии PPPs, метаболитҳои фаъол, ҷаббиш аз рӯда, тақсимшавӣ дар бофтаҳо, бехатарии дарозмуддат ва дозаи эквивалентии инсон муайян нашудаанд.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Таҳқиқоти аслӣ: Chemical Composition, Antioxidant Activity, Anti-Fatigue Function and Mechanism of Pomegranate Peel Polyphenols on Exercise-Induced Fatigue in Mice

Муаллифон: Xing-Yu Ma; Yu-Mei Wang; Yu-Dong Hu; Bin Wang; Li Xu.

Corresponding authors: Bin Wang ва Li Xu.

Муассиса: Zhejiang Provincial Engineering Technology Research Center of Marine Biomedical Products, School of Food and Pharmacy, Zhejiang Ocean University, Zhoushan, China.

Маҷалла: Foods.

Ношир: MDPI, Basel, Switzerland.

Ҷилд / шумора / рақами мақола: 15(9), 1576.

DOI: 10.3390/foods15091576.

Received: 24 Март 2026.

Revised: 24 Апрел 2026.

Accepted: 29 Апрел 2026.

Published: 3 Май 2026.

Навъи мақола: Article; таҳқиқоти таҷрибавии преклиникӣ, ки санҷишҳои антиоксидантии бе ҳуҷайра, модели ҳуҷайра, модели ҳайвон, Western blot ва таҳлилҳои молекулярии docking-ро муттаҳид мекунад.

Баррасии ҳамтоён: Foods маҷаллаи байналмилалии илмии дастрасии кушода ва рецензияшаванда мебошад, ки аз ҷониби MDPI нашр мешавад.

Иҷозатнома: Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0).

Маводи PPPs: Препарати тиҷоратӣ бо тозагии >%90, ки аз Shanxi Jinrun Biotechnology Co., Ltd. гирифта шудааст. Гузориш шудааст, ки миқдори умумии полифенол дар се партияҳои мустақил бо усули Folin–Ciocalteu тасдиқ шудааст.

Намунаи ҳайвон: 90 муши наринаи ICR; 6 ҳафта; 22 ± 2 g.

Дозҳои PPPs барои ҳайвон: 25, 50 ва 100 mg/kg вазни бадан/рӯз; 28 рӯз гаважи даҳонӣ.

Модели ҳуҷайра: HepG2; 400 µM H₂O₂ барои 4 соат осеби оксидативӣ; 10, 20 ва 40 µg/mL PPPs барои 24 соат пештабобат.

Омор: Миёна ± SD; дар таҷрибаҳои ҳуҷайравӣ n = 3 такрори мустақили биологӣ, дар зергурӯҳҳои ҳайвон n = 10; санҷиши муқаррарӣ будан ва якхелагии дисперсия; one-way ANOVA + Tukey; p < 0,05.

Молекулярии docking: Keap1 PDB 2FLU; AMPK PDB 4CFF; AutoDock Vina 1.1.2; PyMOL 2.4.0; Discovery Studio 2019.

Кумитаи ахлоқ: Zhejiang Ocean University Ethics Committee for Experimental Animal; сертификат SYXK (Zhejiang) 2019-0031; 30 Ноябр 2022.

Маблағгузорӣ: National Natural Science Foundation of China, No. 82073764.

Дастрасии маълумот: Гуфта шудааст, ки саҳмҳои аслӣ дар мақола ва Маводҳои Иловагӣ мавҷуданд ва саволҳои иловагӣ метавонанд ба corresponding author-ҳо равона шаванд.

Бархӯрди манфиатҳо: Муаллифон изҳор доштаанд, ки бархӯрди манфиатҳо надоранд.

Саҳми муаллифон: Xing-Yu Ma — куратсияи маълумот, таҳқиқот, тасдиқ ва тарҳи аввал; Yu-Mei Wang — таҳқиқот ва методология; Yu-Dong Hu — куратсияи маълумот ва методология; Bin Wang — консептуализатсия, дарёфти маблағгузорӣ, захираҳо, назорат ва бозбинӣ/таҳрир; Li Xu — захираҳо, назорат ва бозбинӣ/таҳрир.

Маводҳои иловагӣ: Хроматограммаи умумии ионии LC–MS/MS; тасвирҳои хоми Western blot-и таҷрибаҳои Keap1/Nrf2 ва AMPK/PGC-1α/PPAR-α.

Ёддошти профили химиявӣ дар дохили манбаъ: Матни асосӣ мегӯяд, ки 20 пайвастагии муҳим муайян шудааст; дар Ҷадвали 1-и нашршуда ба таври намоён 19 сатри пайвастагӣ мавҷуд аст. Verianla пайвастагии 20-уми норасоро тахмин накардааст.

Ҳадди асосии илмӣ: Натиҷаҳо ба таҷрибаҳои бе ҳуҷайра, ҳуҷайраҳои HepG2, мушҳои наринаи ICR ва таҳлилҳои компютерии docking асос ёфтаанд. Инҳо далели самаранокӣ, доза, бехатарӣ ё истифодаи клиникӣ дар инсон нестанд.

Ҳадди механизм: Тағйироти сафедаҳои вобаста ба Keap1/Nrf2 ва AMPK/PGC-1α/PPAR-α чен карда шуданд; аммо азбаски ингибитсияи роҳ ё таҷрибаҳои талафоти генетикӣ гузаронда нашудаанд, ба таври қатъии сабабӣ нишон дода нашудааст, ки таъсири зиддихастагии PPPs мустақиман тавассути ин роҳҳо ба амал меояд.

Ҳадди docking: Энергияҳои ҳисобшудаи пайвастшавӣ пешгӯиҳои in silico мебошанд, ки таъсирҳои мутақобилаи эҳтимолии ligand–protein-ро дастгирӣ мекунанд; онҳо ченкунии пайвастшавии мустақими биофизикӣ ё ишғоли ҳадафи ҳуҷайравӣ нестанд.

Бозсозии визуалӣ: Тарҳи таҷрибавии Шакли 1 ва робитаҳои механистии Шакли 13-и манбаъ бо ҳифзи маъно ба шакли схемаҳои аслӣ ва бемиқёси Verianla SVG аз нав сохта шудаанд. Флуоресценсияи ROS-и Шакли 5, гистологияи Шакли 6, Western blot-ҳои Шаклҳои 9–10 ва тасвирҳои docking-и Шаклҳои 11–12, азбаски далелҳои таҷрибавӣ/raster мебошанд, ба таври сунъӣ тақлид нашудаанд.

Мувофиқати Verianla Live: Қисман мувофиқ. Ҷараёни таҷриба, муқоисаҳои доза ва муқоисаҳои шиноварӣ/docking бо арзишҳои собити манбаъ барои Live Compare ё Live Process мувофиқанд; аммо азбаски муҳаррики сайт тасдиқ нашудааст, ин HTML статикӣ ва self-contained нигоҳ дошта шудааст.