Байкалин (baicalin), Scutellaria baicalensis глюкурониди флавонӣ мебошад, ки дар решаҳои Georgi мавҷуд аст ва дар ин таҳқиқот потенсиали зиддивирусӣ ва коҳишдиҳандаи шиддати бемории он бар зидди вируси синдроми репродуктивӣ ва респиратории хук (porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV) омӯхта шудааст. Таҳқиқот аввал таҷрибаҳои марҳилавии in vitro-ро дар макрофагҳои ибтидоии алвеолярии хук (porcine alveolar macrophages, PAMs), сипас таҷрибаи ғизодиҳии профилактикиро дар 20 хукбачаи ба таври таҷрибавӣ бо PRRSV сироятшуда истифода бурд. Байкалин то 80 µg/mL қобилияти зиндамонии PAM-ро ба таври назаррас коҳиш надод ва дар давраи сирояти PRRSV қавитарин фаъолияти зиддивирусии ошкоршаванда дар марҳилаи часпидани вирус ба сатҳи ҳуҷайра мушоҳида шуд. Дар хукбачаҳои сироятшуда бори вирусӣ ва ихроҷи вирус аз роҳҳои нафас камтар, таб ва нишонаҳои клиникӣ сабуктар буданд. Аммо азбаски додани байкалин ду рӯз пеш аз ворид кардани вирус оғоз шуда буд, таҳқиқот нишон намедиҳад, ки сирояти аллакай ташаккулёфтаи PRRSV табобат шудааст.

Дар таҷрибаи ҳуҷайравӣ бо зиёд шудани консентратсияи байкалин аз 20 то 80 µg/mL титри вируси сирояткунанда ва сатҳи PRRSV nsp9 mRNA паст шуданд. Дар модели консентратсия–ҷавоби марҳилаи attachment EC50 9,021 µg/mL ҳисоб карда шуд. Дар таҷрибаи қобилияти зиндамонии ҳуҷайра CC50 197,2 µg/mL буд.

Таҷрибаҳои марҳилавӣ фарқи муҳимро нишон доданд: дар шароити санҷидашуда байкалин вирусро мустақиман ғайрифаъол накард; ба воридшавии вирус, репликатсияи дохилиҳуҷайравӣ ё хориҷшавии progeny virus таъсири маънодор нишон надод. Шарте, ки таъсир дар он аз ҳама равшан буд, ҳузури байкалин ҳангоми пайваст шудани PRRSV ба сатҳи PAM буд. Аммо таҳқиқот муайян накард, ки байкалин мустақиман ба сафедаи лифофаи вирусӣ, ба attachment factor-и сатҳи ҳуҷайра ё ба ҷузъи дигари аввали сироят таъсир мекунад.

Дар таҷрибаи ҳайвонот дар гурӯҳи PRRSV + байкалин чор аз панҷ ҳайвон, дар гурӯҳи танҳо PRRSV бошад як аз панҷ ҳайвон то охири таҷриба расиданд. Гарчанде ин фарқи шуморӣ равшан менамояд, муқоисаи Kaplan–Meier \(p=0{,}082\) ва Fisher exact test \(p=0{,}206\) буд, бинобар ин фарқи зиндамонӣ аз ҷиҳати оморӣ маънодор нест. Аз ин рӯ, натиҷаи зиндамонӣ бояд ҳамчун бозёфти ибтидоӣ арзёбӣ шавад.

Чаро PRRSV патогени хук аст, ки назораташ душвор мебошад?

PRRSV патогени муҳими хук аст, ки метавонад дар ҳайвоноти наслдиҳанда талафоти репродуктивӣ, дар хукҳои ҷавон бемории роҳи нафас ва ақибмонии рушдро ба вуҷуд орад; инчунин бо халалдор кардани ҷавобҳои масунии модарзодӣ ва ҳосилшуда ҳассосиятро ба сироятҳои дуюмдараҷа зиёд карда метавонад.

Ваксинагузаронӣ, биобехатарӣ, устуворсозии рама ва мониторинги патоген ҷузъҳои асосии назорати PRRS мебошанд. Бо вуҷуди ин, гуногунии генетикӣ ва антигении PRRSV метавонад муҳофизати гетерологии ваксинаро бар зидди штаммҳои гуногуни саҳроӣ маҳдуд кунад. Ҳадафи таҳқиқот ҷойгузини нав барои ваксинаҳо пешниҳод кардан нест, балки арзёбии пайвастагиҳои иловагии зиддивирусӣ мебошад, ки метавонанд барномаҳои мавҷудаи назоратро дастгирӣ кунанд.

Байкалин чист?

Байкалин, Scutellaria baicalensis глюкурониди флавонӣ ва яке аз ҷузъҳои асосии биоактивии решаҳои Georgi мебошад. Дар таҳқиқоти таҷрибавии қаблӣ дар сироятҳои гуногуни вирусӣ ва моделҳои илтиҳобӣ фаъолияти зиддивирусӣ, антиоксидантӣ ва танзимкунандаи масуният гузориш шудааст.

Гарчанде таҳқиқоти қаблӣ оид ба PRRSV фаъолияти in vitro-и байкалинро бар зидди баъзе штаммҳо нишон дода бошанд ҳам, ҳанӯз пурра муайян нашудааст, ки кадом марҳилаи давраи ҳаёти вирус ҳадафи асосӣ аст, дараҷаи самаранокии муҳофизатӣ дар хукбачаҳои сироятшуда чӣ қадар аст ва байни таъсири зиддивирусӣ ва тағйироти илтиҳобӣ чӣ робита вуҷуд дорад.

Фарзияи таҳқиқот

Муаллифон пешниҳод карданд, ки байкалин метавонад бар зидди PRRSV тавассути ду раванди мукаммалкунанда муҳофизат фароҳам оварад: дахолат ба ҳамкории аввали вирус–ҳуҷайра ва баъдан суст шудани ҷавоби проилтиҳобӣ.

Қисми якуми ин фарзия мустақиман бо таҷрибаҳои марҳилавии ҳуҷайравӣ омӯхта шуд. Қисми дуюм бо ченкуниҳои IL-1β, IL-6, IL-8 ва TNF-α дар ҳайвонот арзёбӣ гардид. Аммо таҳлили ковариатсионии таҳқиқот натавонист фарқ кунад, ки тағйироти илтиҳобӣ мустақиман аз байкалин ба вуҷуд омадааст ё натиҷаи дуюмдараҷаи бори вирусии пасттар мебошад.

Байкалин дар кадом марҳилаи сирояти PRRSV қавитарин таъсири зиддивирусиро нишон дод?

Дар байни шароити марҳилавии in vitro-и санҷидашуда байкалин қавитарин фаъолияти зиддивирусии ошкоршавандаро дар марҳилаи часпидани PRRSV ба сатҳи ҳуҷайраи PAM нишон дод; дар шароити ғайрифаъолкунии мустақими вирус, воридшавии вирус, репликатсияи дохилиҳуҷайравӣ ва хориҷшавии progeny virus бошад таъсири маънодори зиддивирусӣ муайян нашуд. Ин натиҷа ба марҳилаи attachment ишора мекунад, вале ҳадафи мустақими молекулавии байкалинро муайян намекунад.

Мантиқи таҷрибаҳои марҳилавӣ

Нишон додани он ки як пайвастагии зиддивирусӣ “вирусро кам мекунад” худ аз худ шарҳ намедиҳад, ки он дар кадом марҳилаи биологӣ таъсир мекунад. Аз ин рӯ, муҳаққиқон марҳилаҳои гуногуни давраи ҳаёти PRRSV-ро дар тарҳҳои алоҳидаи таҷрибавӣ санҷиданд.

Чаро 4 °C истифода шуд?

Дар таҷрибаи attachment ҳарорати паст барои он истифода шуд, ки ба вирус имкони пайваст шудан ба сатҳи ҳуҷайра дода шавад, дар ҳоле ки равандҳои воридшавии дохилиҳуҷайравии вобаста ба энергия ба таври назаррас маҳдуд гарданд. Бо ин роҳ марҳилаи пайвастшавӣ аз раванди баъдии internalization ба таври таҷрибавӣ ҷудо карда шуд.

Оё натиҷаи attachment сафедаи ҳадафро муайян мекунад?

Не. Тамоси аввали PRRSV бо ҳуҷайра метавонад бо ҷузъҳои гуногуни сатҳӣ, аз ҷумла heparan sulfate ва CD169 алоқаманд бошад; CD163 бошад барои сирояти маҳсулнок муҳим аст, вале бештар дар равандҳои internalization, fusion-и мембрана ва uncoating вазифа иҷро мекунад.

Азбаски байкалин дар марҳилаи attachment таъсирнок буд, аз ҷиҳати биологӣ мумкин аст ба сафедаи лифофаи вирусӣ ё ҷузъи сатҳи ҳуҷайра дахолат кунад; аммо манбаъ таҷрибаи пайвастшавии мустақим, вобастагӣ ба ретсептор ё ҳамкории молекулавӣ анҷом надодааст. Таъйини ҳадафи мушаххаси молекулавӣ аз ҳудуди маълумоти мавҷуда мегузарад.

Байкалин ва baicalein як молекула нестанд

Манбаъ муҳокима мекунад, ки барои baicalein, шакли агликонии байкалин, дар адабиёт пайвастшавии мустақим ба PRRSV ва таъсирҳои вобаста ба EGFR/PI3K–AKT гузориш шудаанд. Аммо азбаски глюкуронидашавӣ қутбият, гузаронандагии мембрана ва пайвастшавӣ ба сафедаро тағйир медиҳад, механизме, ки барои baicalein нишон дода шудааст, наметавонад мустақиман ба байкалин интиқол дода шавад.

Оё ин таҳқиқот нишон медиҳад, ки байкалин табобати PRRSV аст?

Не. Дар таҷрибаи ҳайвонот додани байкалин ду рӯз пеш аз PRRSV challenge оғоз шуда, дар давоми сироят бо хӯрок идома ёфтааст; азбаски гурӯҳи алоҳидае вуҷуд надошт, ки табобат пас аз сироят оғоз шавад, таҳқиқот нишон намедиҳад, ки сирояти аллакай ташаккулёфтаи PRRSV табобат шудааст. Манбаъ бозёфтҳои ҳайвонотро ҳамчун далели proof-of-concept барои иловаи ғизоии профилактикӣ маҳдуд мекунад.

Фарқи байни профилактика ва терапия

Дар тарҳи профилактикӣ пайвастагӣ пеш аз рӯ ба рӯ шудани организм бо патоген дар организм мавҷуд аст. Дар тарҳи табобатӣ бошад дахолат пас аз ташаккули сироят, муайян шудани вирус ё оғози нишонаҳои клиникӣ оғоз мешавад.

Дидани фаъолияти асосии in vitro-и байкалин дар марҳилаи аввали attachment ин фарқро боз ҳам муҳимтар мекунад. Агар қавитарин таъсири ошкоршавандаи пайвастагӣ дар нуқтаи аввали тамоси вирус–ҳуҷайра бошад, мавҷуд будани пайвастагӣ пеш аз challenge шароити аз ҷиҳати таҷрибавӣ мусоид мебошад.

Маҳдудияти дигари истифодаи даҳонии байкалин

Манбаъ қайд мекунад, ки биодастрасии даҳонии байкалин бинобар ҷаббиши рӯда, метаболизм ва коркарди энтерогепатикӣ маҳдуд аст. Аз ин рӯ, дозаи номиналӣ дар хӯрок ва экспозитсияи фаъол дар бофтаи ҳадаф як мафҳум нестанд.

Муаллифон пешниҳод мекунанд, ки дар оянда стратегияҳои формулятсионӣ, ба монанди комплексҳои фосфолипидӣ, нанозарраҳо ё дигар системаҳои интиқол арзёбӣ шаванд; инҳо дар таҳқиқоти ҳозира санҷида нашудаанд.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Системаи ҳуҷайра ва вирус

Primer porcine alveolar macrophages (PAMs) ва штамми хеле патогении PRRSV-2 SCSN2020 аз ҷониби Chengdu Agricultural College Animal Disease Diagnostic Center таъмин шуданд.

PAM-ҳо ҳамчун модели асосии ҳуҷайравӣ дар арзёбии зиддивирусии таҳқиқот истифода шуданд, зеро онҳо системаи ибтидоии ҳуҷайравии аз ҷиҳати биологӣ ба ҳуҷайраҳои табиии ҳадафи PRRSV алоқамандро таъмин мекунанд.

Таҷрибаи қобилияти зиндамонии ҳуҷайра

Байкалин дар DMSO ҳал карда шуда, тавассути филтри 0,22 µm стерил ва дар муҳити культура ба консентратсияҳои зерин тунук карда шуд:

10, 20, 40, 60, 80, 100, 200, 300, 400 ва 500 µg/mL.

Дар ҳамаи чоҳакҳои байкалин консентратсияи ниҳоии DMSO дар %0,1 нигоҳ дошта шуд. Дар ҳар шароит ҳашт такрори техникӣ истифода шуд ва пас аз 48 соати инкубатсия OD450 бо CCK-8 чен карда шуд.

Муодилаи дар манбаъ додашуда:

\[ \text{Cell viability inhibition rate}(\%)= \left( 1- \frac{OD_{450,\ treatment}-OD_{450,\ blank}} {OD_{450,\ mock}-OD_{450,\ blank}} \right)\times100 \]

чунин аст.

Ёддошти метрикии дохили манбаъ: усул ин ифодаро “cell viability inhibition rate” меномад, дар ҳоле ки натиҷаҳои Расми 1 қобилияти зиндамонии ҳуҷайраро ҳамчун фоизи Mock нишон медиҳанд. Азбаски ду номгузорӣ дар манбаъ бо як ифода пешниҳод нашудаанд, Verianla ин фарқро пинҳон намекунад.

Натиҷаи токсикияти ҳуҷайравӣ

Дар диапазони 10–80 µg/mL пас аз 48 соат қобилияти зиндамонии ҳуҷайра зиёда аз %80 боқӣ монд. Дар консентратсияҳои 200 µg/mL ва болотар қобилияти зиндамонӣ ба таври назаррас коҳиш ёфт; регрессияи логистикии чорпараметрӣ:

\[ CC_{50}=197{,}2\ \mu g/mL \]

натиҷаро дод.

Аз ин рӯ, дар таҷрибаҳои зиддивирусии марҳилавӣ 80 µg/mL ҳамчун яке аз ҳадҳои болоии диапазони ғайриситотоксикии дар манбаъ санҷидашуда истифода шуд.

RT-qPCR

Аз ҳуҷайра, бофта ва тампонҳо RNA-и умумӣ ҷудо карда шуд; тозагӣ ва консентратсияи RNA бо спектрофотометри ScanDrop чен гардида, бо истифода аз PrimeScript RT Kit cDNA синтез карда шуд.

Шумораи нусхаҳои PRRSV ва сатҳҳои PRRSV nsp9 бо qPCR арзёбӣ шуданд. Экспрессияи нисбии ген нисбат ба гени истинодии β-actin бо:

\[ 2^{-\Delta\Delta C_t} \]

усул ҳисоб карда шуд.

Титркунии вирус

Намунаҳои PRRSV 10 маротиба пайдарпай тунук карда шуда, ҳар як тунуккунӣ ба ҳашт чоҳи техникӣ татбиқ шуд. Таъсири ситопатикӣ се рӯз пайгирӣ шуд; дозаи сирояткунандаи %50 культураи бофта бо усули Reed–Muench ҳисоб карда шуда:

log10 TCID50/mL

ифода карда шуд.

Ҳар титркунии вирус аз се таҷрибаи мустақил иборат буд ва дар ҳар тунуккунӣ ҳашт такрори техникӣ истифода шуд. Воҳиди таҷрибавии оморӣ чоҳакҳои алоҳидаи техникӣ не, балки таҷрибаҳои мустақил мебошанд.

Натиҷаи консентратсия–ҷавоби Attachment

Дар таҷрибаи attachment байкалин дар консентратсияҳои 20, 40 ва 80 µg/mL титрҳои вирусро нисбат ба назорат ба таври маънодор коҳиш дод ва бузургтарин коҳиш дар 80 µg/mL дида шуд.

Дар модели логистикии чорпараметрии консентратсия–ҷавоб, ки аз консентратсияҳои 5, 10, 20, 40, 60 ва 80 µg/mL сохта шуд:

\[ EC_{50}=9{,}021\ \mu g/mL \]

ҳисоб карда шуд.

Сатҳи nsp9 mRNA низ дар ҳамин шароити attachment бо афзоиши консентратсия коҳиш ёфт.

Тарҳи таҷрибаи ҳайвонот

Чор гурӯҳи ҳайвонот

1. Mock: хӯроки стандартӣ, PRRSV нест.
2. Байкалин: 0,1 g/kg хӯрок бо байкалин, PRRSV нест.
3. PRRSV: хӯроки стандартӣ + PRRSV challenge.
4. PRRSV + байкалин: 0,1 g/kg хӯрок бо байкалин + PRRSV challenge.

Гурӯҳҳо барои пешгирии сирояти байниҳамдигарӣ алоҳида нигоҳ дошта шуданд. Муҳаққиқоне, ки RT-qPCR, ELISA, баҳодиҳии клиникӣ ва арзёбии гистопатологиро анҷом медоданд, то анҷоми ченкуниҳои дахлдор аз таъйини гурӯҳҳо огоҳ набуданд.

Шароити нигоҳдорӣ

Ҳайвонот пас аз се рӯзи акклиматизатсия дар шароити тақрибан 28 ± 1 °C ва %60 ± 5 намии нисбӣ нигоҳ дошта шуданд; дастрасии озод ба хӯрок ва об таъмин гардид. Пеш аз ворид шудан ба таҳқиқот тасдиқ шуд, ки ҳамаи ҳайвонот аз рӯи антигени PRRSV ва антителаҳои хоси PRRSV манфӣ мебошанд.

Намунагирӣ

Дар рӯзҳои 3, 7, 14, 17 ва 21 хун, тампони орофарингеалӣ ва тампони бинӣ гирифта шуданд. Аз ҳайвоноти дар ҳоли марг ё мурда; инчунин аз зиндамондагон дар анҷоми таҷриба шуш, ҷигар, гурда, гиреҳи лимфавии hilar, испурч ва дигар бофтаҳои марбут ҷамъоварӣ шуданд.

Виремия ва ихроҷи вирусӣ бо qRT-PCR арзёбӣ шуданд.

Оё фарқи зиндамонӣ аз ҷиҳати оморӣ маънодор буд?

Не. Гарчанде дар гурӯҳи PRRSV + байкалин 4/5 ва дар гурӯҳи танҳо PRRSV 1/5 ҳайвон то охири таҷриба расиданд, Kaplan–Meier log-rank test \(p=0{,}082\) ва Fisher exact test барои зиндамонии рӯзи 26 \(p=0{,}206\) буд; бинобар андозаи хурди гурӯҳ ин натиҷа далели қатъии фоидаи зиндамонӣ нест, балки бозёфти ибтидоии тавсифӣ мебошад.

Ҷараёни клиникӣ

Дар гурӯҳҳои Mock ва танҳо байкалин ҳарорати ректалӣ дар давоми таҷриба дар доираи муқаррарӣ монд. Дар гурӯҳи PRRSV ҳарорат тақрибан панҷ рӯз пас аз сироят баланд шуд, муддати дароз аз 40 °C боло буд ва дар нуқтаи авҷ аз 41 °C гузашт.

Дар гурӯҳи PRRSV + байкалин низ таби муваққатӣ ба вуҷуд омад; аммо бузургии болоравии ҳарорат камтар буд ва қиматҳо умуман дар доираи 39–40 °C монданд.

Вазни бадан ва холҳои клиникӣ

Гурӯҳҳои Mock ва танҳо байкалин мунтазам вазн гирифтанд. Дар гурӯҳи PRRSV афзоиши вазн сахт фурӯ нишонда шуд ва дар марҳилаи дерини сироят вазни бадан тамоюли коҳишро нишон дод.

Дар гурӯҳи PRRSV + байкалин афзоиши вазн дар давраи аввал суст буд, вале дар давраҳои миёна ва дер боз зиёд шуд. Холҳои клиникӣ низ нисбат ба гурӯҳи танҳо PRRSV пасттар буданд ва дар давраи дер ба сатҳҳои ибтидоӣ наздик шуданд.

Виремия

Дар гурӯҳи танҳо PRRSV бори вирусии зардоб дар рӯзи 3 ошкоршаванда шуд, байни рӯзҳои 14–17 ба сатҳҳои баланд расид ва бо вуҷуди коҳиш дар рӯзи 21 баланд боқӣ монд.

Дар гурӯҳи PRRSV + байкалин нусхаҳои PRRSV дар зардоб дар тамоми давраи намунагирӣ пасттар буданд; дар рӯзҳои 7, 14 ва 17 коҳишҳои қавӣ ва дар рӯзҳои 3 ва 21 низ коҳишҳои маънодор гузориш шуданд.

Ихроҷи орофарингеалӣ ва бинӣ

Дар гурӯҳи PRRSV бори вирусии орофарингеалӣ тақрибан дар рӯзи 14 ба авҷ расид. Дар ҳайвоноти сироятшудае, ки байкалин гирифтанд, нусхаҳои орофарингеалии PRRSV пасттар буданд.

Дар тампонҳои бинӣ низ намунаи ихроҷе мушоҳида шуд, ки аз рӯзи 3 оғоз шуда, тақрибан рӯзи 14 афзуда, баъдан коҳиш ёфт; қиматҳои гурӯҳи PRRSV + байкалин аз гурӯҳи PRRSV пасттар буданд.

Патологияи макроскопӣ

Дар шушҳои гурӯҳи PRRSV тағйири ранги сурхи тира, конгестсияи равшан, геморрагия ва минтақаҳои консолидация дида шуданд. Дар гиреҳҳои лимфавии hilar ва inguinal низ тағйироти равшани ранг ва очоқҳои геморрагӣ мушоҳида шуданд.

Дар гурӯҳи PRRSV + байкалин конгестсияи шуш, геморрагия ва консолидация сабуктар менамуданд ва меъмории лобулярӣ беҳтар нигоҳ дошта шуд. Бо вуҷуди ин, баъзе осебҳои фокалӣ ва конгестсияи сабук пурра аз байн нарафтанд.

Гистопатология

Дар шушҳои гурӯҳи PRRSV пневмонияи интерстициалӣ; ғафсшавии септаҳои алвеолярӣ, тангшавии фазоҳои алвеолярӣ, инфилтратсияи ҳуҷайраҳои илтиҳобӣ дар атрофи бронхҳо ва рагҳо ва вайроншавии фокалии меъмории бофта мушоҳида шуданд.

Дар гиреҳҳои лимфавии hilar ва inguinal вайроншавии ташкили лимфоидӣ, кам шудани лимфоситҳо ва зарари фокалии ҳуҷайравӣ мушоҳида шуд.

Дар гурӯҳи PRRSV + байкалин сохтори алвеолярӣ беҳтар нигоҳ дошта шуд; ғафсшавии септалӣ ва инфилтратсияи илтиҳобӣ сабуктар менамуданд. Дар гиреҳҳои лимфа низ ташкили бофта беҳтар нигоҳ дошта шуд.

Бо вуҷуди ин, гарчанде холҳои миқдории макроскопӣ ва гистопатологӣ дар гурӯҳи PRRSV + байкалин тамоюли поёнравиро нишон доданд, фарқҳо нисбат ба гурӯҳи PRRSV ба сатҳи маънодории оморӣ нарасиданд.

Усули гистопатология

Бофтаҳо дар %4 параформалдегид фиксация шуда, аз силсилаи этаноли дараҷабандишуда гузаронида, ба парафин ҷойгир шуданд ва буришҳои 4 µm омода карда шуданд. Буришҳо бо гематоксилин-эозин (H&E) ранг карда шуда, бо микроскопи Nikon Eclipse 50i арзёбӣ гардиданд.

Ситокинҳои илтиҳобии зардоб

Консентратсияҳои зардобии IL-1β, IL-6, IL-8 ва TNF-α бо ELISA чен карда шуданд. Сирояти PRRSV ҳамаи чор ситокинро баланд кард.

Дар гурӯҳи PRRSV + байкалин ҳамаи чор ситокин дар рӯзҳои 7 ва 14 нисбат ба гурӯҳи PRRSV ба таври маънодор пасттар буданд.

Дар таҳлили Расми 9 гурӯҳ, вақт ва таъсири мутақобилаи гурӯҳ × вақт ҳамчун таъсирҳои собит; бо дохил кардани хукбачаи инфиродӣ ҳамчун омили ченкунии такрорӣ mixed-effects model истифода шуд ва муқоисаҳои нуқтаҳои вақти пешакӣ муайяншуда бо ислоҳи Šídák анҷом дода шуданд.

Оё байкалин ситокинҳои илтиҳобиро мустақиман фурӯ нишонд?

Ин таҳқиқот инро муайян карда натавонист. Гарчанде дар гурӯҳи PRRSV + байкалин IL-1β, IL-6, IL-8 ва TNF-α пасттар буданд, дар ҳамин ҳайвонот бори вирусӣ низ ба таври равшан пасттар буд; вақте бори вирусӣ ҳамчун ковариат илова шуд, таъсирҳои гурӯҳии ислоҳшуда маънодор боқӣ намонданд ва азбаски тақсимоти бори вирусии гурӯҳҳо ба ҳам намепӯшид, коллинеарияти қавӣ ба вуҷуд омад. Натиҷаҳо механизми мустақими иммуномодуляториро аз коҳиши дуюмдараҷаи илтиҳоб вобаста ба бори вирусии пасттар боэътимод ҷудо карда наметавонанд.

Чаро ин фарқ муҳим аст?

Вируси камтар метавонад макрофагҳои сироятшудаи камтар ва аз ин рӯ ангезиши илтиҳобии пасттар ба вуҷуд орад. Дар ин ҳолат барои паст шудани ситокинҳо шарт нест, ки байкалин мустақилона ба роҳи сигналии илтиҳобӣ дахолати мустақим кунад.

Аз тарафи дигар, байкалин дар моделҳои гуногуни илтиҳоб бо NF-κB, MAPK, стресси оксидативӣ ва сигнали inflammasome алоқаманд дониста шудааст. Таҳқиқоти ҳозира ин эҳтимоли биологиро истисно намекунад, вале иммуномодулятсияи мустақими сабабиро дар модели PRRSV исбот намекунад.

Таҳлили оморӣ

Таҳлилҳо бо GraphPad Prism 9.5.1 анҷом дода шуданд. Дар таҷрибаҳои ҳайвонот воҳиди таҷрибавӣ як хукбача мебошад. Дар таҷрибаҳои ҳуҷайравӣ воҳиди таҷрибавӣ чоҳи техникӣ не, балки таҷрибаи мустақил аст; такрорҳои техникӣ пеш аз таҳлили оморӣ дар дохили таҷрибаи мустақил миёнагирӣ шуданд.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ мекунад

• Байкалин дар диапазони ғайриситотоксикии дар PAM-ҳо санҷидашуда титрҳои сирояткунандаи PRRSV ва сатҳҳои nsp9 mRNA-ро вобаста ба консентратсия коҳиш дод.
• Дар байни шароити санҷидашудаи давраи ҳаёт қавитарин фаъолияти зиддивирусии ошкоршаванда дар марҳилаи attachment дида шуд.
• EC50 дар таҷрибаи attachment 9,021 µg/mL ҳисоб карда шуд.
• CC50 дар таҷрибаи қобилияти зиндамонии ҳуҷайра 197,2 µg/mL ҳисоб карда шуд.
• Дар хукбачаҳои сироятшудае, ки байкалини профилактикии парҳезӣ гирифтанд, бори вирусии зардоб ва ихроҷи вирусии респираторӣ пасттар буданд.
• Таб, холҳои клиникӣ ва тамоюли талафоти вазн дар гурӯҳи PRRSV + байкалин сабуктар буданд.
• Зарари шуш ва гиреҳҳои лимфа аз ҷиҳати гистологӣ сабуктар менамуд; аммо дар холҳои умумии осеб нисбат ба гурӯҳи PRRSV фарқи омории маънодор нишон дода нашуд.
• IL-1β, IL-6, IL-8 ва TNF-α дар рӯзҳои 7 ва 14 дар гурӯҳи PRRSV + байкалин пасттар буданд.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ намекунад

• Нишон намедиҳад, ки байкалин пас аз ташаккули сироят табобати самараноки PRRSV аст.
• Нишон намедиҳад, ки байкалин метавонад ҷойи ваксинаҳоро гирад; манбаъ онро ҳамчун дахолати эҳтимолии иловагӣ ҷойгир мекунад.
• Ҳадафи мустақими молекулавии байкалинро дар марҳилаи attachment муайян намекунад.
• Муайян намекунад, ки байкалин ба зарраи вирусӣ ё ба attachment factor-и ҳуҷайравӣ пайваст мешавад.
• Исбот намекунад, ки байкалин ситокинҳоро тавассути механизми мустақили аз бори вирусӣ мустақил кам мекунад.
• Нишон намедиҳад, ки фарқи зиндамонии 4/5 бар зидди 1/5 аз ҷиҳати оморӣ қатъӣ аст.
• Нишон намедиҳад, ки натиҷаҳои як штамми SCSN2020 барои ҳамаи вариантҳои PRRSV-1 ва PRRSV-2 дурустанд.
• Нишон намедиҳад, ки дозаи 0,1 g/kg хӯрок дозаи оптималӣ аст.
• Бехатарӣ ё самаранокии дарозмуддати рамаи тиҷоратиро тасдиқ намекунад.

Маҳдудиятҳои асосӣ

1. Оғози профилактикӣ: Байкалин ду рӯз пеш аз challenge дода шуд.
2. Гурӯҳи табобати post-challenge вуҷуд надорад: Самаранокии терапевтӣ дар сирояти ташаккулёфта номаълум аст.
3. Гурӯҳи хурди ҳайвонот: Дар ҳар гурӯҳ танҳо панҷ хукбача буд.
4. Як доза: Дар таҷрибаи ҳайвонот танҳо дозаи 0,1 g/kg хӯрок истифода шуд.
5. Як штамми вирусӣ: SCSN2020 арзёбӣ шуд, штаммҳои PRRSV-и аз ҷиҳати генетикӣ гуногун санҷида нашуданд.
6. Як системаи ибтидоии ҳуҷайра: Таҳлили in vitro бо PAM-ҳо анҷом дода шуд; системаҳои дигар ба монанди MARC-145 истифода нашуданд.
7. Ҳадафи молекулавӣ номаълум: Таҷрибаҳои binding ва receptor-dependency анҷом дода нашуданд.
8. Механизми масуният маҳдуд аст: Интерферонҳои навъи I, interferon-stimulated genes, фаъолияти NK, ҳуҷайраҳои T-и хоси PRRSV ва антителаҳои нейтрализатсиякунанда чен карда нашуданд.
9. Биодастрасии даҳонӣ: Ҷаббиши даҳонии байкалин маҳдуд аст ва оптимизатсияи формулятсия анҷом дода нашудааст.

Ёддоштҳои гузоришдиҳии дохили манбаъ

Дар бахши 3.2-и натиҷаҳои in vitro барои татбиқи культураи ҳуҷайра ибораи “prophylactic dietary baicalin supplementation” истифода шудааст; дар муқобил, бахши усулҳо равшан тавсиф мекунад, ки байкалин ба PAM-ҳо дар муҳити культура татбиқ шудааст. Verianla усули in vitro-ро мувофиқи Methods 2.4 меорад ва калимаи “dietary”-ро ҳамчун тартиби воқеии таҷрибаи ҳуҷайравӣ такрор намекунад.

Илова бар ин, муодилаи CCK-8 дар бахши усулҳо “cell viability inhibition rate” номида мешавад, дар ҳоле ки графики натиҷа “cell viability (% of Mock)” нишон медиҳад. Verianla ин фарқи терминологии дохили манбаъро бо формулаи нав ислоҳ намекунад.

Таҳқиқоти оянда

Мувофиқи манбаъ, таҳқиқоти оянда бояд вақтҳои табобати post-challenge, робитаи доза–ҷавоб ва равзанаи терапевтиро мустақиман арзёбӣ кунанд.

Фарогирии зиддивирусӣ бояд дар HP-PRRSV, NADC30-like, NADC34-like ва штаммҳои аз ҷиҳати генетикӣ гуногуни PRRSV-1/PRRSV-2 санҷида шавад.

Барои муайян кардани он ки байкалин мустақиман ба вирус ё attachment factor-ҳои ҳуҷайравӣ пайваст мешавад ё не, усулҳои миқдории binding ва таҷрибаҳои receptor-dependency заруранд.

Стратегияҳои формулятсионӣ барои баланд бардоштани биодастрасии даҳонӣ ва тасдиқҳои мустақил дар шароити истеҳсолии тиҷоратӣ бояд пеш аз стандартизатсия ҳамчун иловаи хӯрокӣ алоҳида арзёбӣ шаванд.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Унвони аслӣ: Antiviral Activity of Baicalin Against PRRSV In Vitro and in Infected Piglets

Муаллифон: Zhiping Lu; Lei Xu; Dike Jiang; Ruijiao Jiang; Tianxiang Chen; Chunlin Fang; Hongli Jiang; Zili Li

Саҳми баробар: Zhiping Lu ва Lei Xu

Муаллифи масъул: Zili Li

Муассиса 1: Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine of Hubei Province, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China

Муассиса 2: College of Animal Science and Veterinary Medicine, Chengdu Agricultural College, Chengdu 611130, China

Маҷалла: Veterinary Sciences

Ношир: MDPI

Навъи нашр: Мақолаи таҳқиқотии таҷрибавии аз тақризи ҳамтоён гузашта ва дастрасии кушода

Сабти библиографӣ: Veterinary Sciences, 2026, 13(9), 915

DOI: 10.3390/vetsci13090915

Ирсол: 11 августи 2026

Бознигарӣ: 31 августи 2026

Қабул: 2 сентябри 2026

Нашр: 6 сентябри 2026

Иҷозатнома: Creative Commons Attribution (CC BY).

Навъи асосии таҳқиқот: Таҷрибаҳои марҳилавии зиддивирусӣ дар культураи ибтидоии ҳуҷайра + таҳқиқоти хукбачаҳои бо PRRSV ба таври таҷрибавӣ сироятшуда.

Вирус: PRRSV-2 SCSN2020-и хеле патогенӣ.

Системаи ҳуҷайра: Primer porcine alveolar macrophages (PAMs).

Усулҳои асосии in vitro: Қобилияти зиндамонии ҳуҷайра CCK-8; титркунии вирус TCID50; qRT-PCR; санҷишҳои марҳилавии direct virucidal, attachment, entry, intracellular replication ва progeny-release.

Намунаи ҳайвонот: 20 хукбачаи модаи 21-рӯзаи Yorkshire; чор гурӯҳ, n=5.

Дозаи байкалин дар ҳайвонот: 0,1 g/kg хӯрок; аз ду рӯз пеш аз challenge оғоз карда дар тамоми таҷриба.

Challenge: 3 mL SCSN2020, \(10^6\) TCID50/mL, интраназалӣ.

Рӯзҳои асосии намунагирӣ: 3, 7, 14, 17 ва 21.

Гистопатология: Фиксация бо %4 параформалдегид; буриши парафинии 4 µm; H&E; Nikon Eclipse 50i.

Ситокинҳо: IL-1β, IL-6, IL-8 ва TNF-α-и зардоб; ELISA.

Нармафзори оморӣ: GraphPad Prism 9.5.1.

Этика: Chengdu Agricultural College Ethics Committee; протокол 2025030001001; санаи тасдиқ 11 марти 2025.

Розигии огоҳона: Татбиқ намешавад.

Маблағгузорӣ: Tianfu Qingcheng Project (Tianfu Agricultural Master), grant 20221226; Rongcheng Talent Program, grant 20250925.

Дастрасии маълумот: Гуфта шудааст, ки саҳмҳои аслӣ дар дохили мақола мавҷуданд ва саволҳои иловагӣ метавонанд ба муаллифони аввал равона шаванд.

Бархӯрди манфиатҳо: Муаллифон бархӯрди манфиатҳоро гузориш накардаанд.

Саҳми муаллифон: Консептуализатсия Zili Li ва Zhiping Lu; методология Zhiping Lu, Dike Jiang ва Lei Xu; нармафзор Zhiping Lu ва Lei Xu; тасдиқ Ruijiao Jiang, Tianxiang Chen ва Hongli Jiang; таҳлили формалӣ Zhiping Lu ва Zili Li; таҳқиқот Zhiping Lu ва Chunlin Fang; захираҳо Zhiping Lu ва Zili Li; куратсияи маълумот Zhiping Lu ва Dike Jiang; тарҳи аввал Zhiping Lu, Lei Xu ва Dike Jiang; бознигарӣ/таҳрир Tianxiang Chen ва Chunlin Fang; визуализатсия Zhiping Lu ва Lei Xu; назорат Zili Li; идоракунии лоиҳа Zhiping Lu ва Hongli Jiang; дарёфти маблағгузорӣ аз ҷониби Zhiping Lu анҷом дода шудааст.

Муҳимтарин маҳдудияти тафсир: Азбаски дар таҷрибаи ҳайвонот истифодаи байкалин пеш аз сироят оғоз шуд, бозёфтҳо барои дахолати ғизоии профилактикӣ хусусияти proof-of-concept доранд; онҳо далели табобати сирояти ташаккулёфтаи PRRSV нестанд.

Маҳдудияти зиндамонӣ: Фарқи мушоҳидашудаи зиндамонии 4/5 бар зидди 1/5 дар санҷишҳои log-rank ва Fisher ба маънодории оморӣ нарасид.

Маҳдудияти механизми масуният: Сатҳҳои пасттари ситокинҳо байни иммуномодулятсияи мустақими байкалин ва таъсири дуюмдараҷаи бори вирусии пасттар боэътимод ҷудо карда нашуданд.

Маҳдудияти ҳадафи молекулавӣ: Марҳилаи attachment нуқтаи асосии таъсири ошкоршаванда мебошад; аммо ҳадафи мустақими вирусӣ ё ҳуҷайравӣ муайян нашудааст.

Ёддошти терминологии дохили манбаъ: Ибораи “dietary” дар натиҷаҳои in vitro бо шакли воқеии татбиқи усули культураи ҳуҷайра мувофиқ нест; инчунин номи муодилаи CCK-8 ва пешниҳоди “cell viability” дар Расми 1 истилоҳоти гуногунро истифода мебаранд.

Азнавкашии визуалӣ: Давраи ҳаёти PRRSV ва нақшаи таъсири мутамарказ ба attachment, мантиқи консентратсия–ҷавоби ҳуҷайра, тарҳи таҷрибаи ҳайвонот, силсилаҳои вақтии виремия/ихроҷ ва муқоисаҳои клиникӣ/патологӣ метавонанд барои Verianla ба шакли аслӣ аз нав сохта шаванд. Азбаски худи тасвирҳои гистопатологӣ далели таҷрибавӣ мебошанд, ба ҷойи тавлиди H&E/микроскопияи сохта истифодаи иҷозатномадори тасвири манбаъ ё схемаи шарҳдиҳанда афзал аст.

Мутобиқати Verianla Live: Барои Live Process, Live Line, Live Compare ва Live Data дараҷаи баланди мутобиқат дорад. Симулятсияи идорашавандаи корбар, ки берун аз маълумоти манбаъ натиҷаи доза–ҷавоб ё табобатро ҳисоб мекунад, мувофиқ нест.