Blastocystis spp. протисти анаэробӣ ва аз ҷиҳати генетикӣ гуногун буда, метавонад дар рӯдаи одамон ва бисёр ҳайвонот мавҷуд бошад; ин тадқиқот як омӯзиши иктишофӣ, буриши уфуқӣ ва мушоҳидавӣ мебошад, ки меомӯзад оё ҷомеаи бактериявии наҷосат ва профили кислотаҳои равғании занҷири кӯтоҳ дар қутосҳои исҳолдор, ки ба таври табиӣ Blastocystis-мусбат мебошанд, аз қутосҳои исҳолдори Blastocystis-манфӣ фарқ мекунад ё не. Аз як хоҷагии Лҳаса 30 намунаи наҷосати қутосҳои исҳолдор санҷида шуд; дар скрининги ибтидоии молекулавӣ 11 намуна мусбат баромад ва дар шаштои онҳо тасдиқи секвенсӣ бомуваффақият анҷом дода шуд. Таҳлили муқоисавӣ дар шаш қутоси исҳолдори Blastocystis-мусбат ва шаш қутоси исҳолдори Blastocystis-манфӣ, ки тасодуфӣ интихоб шуда буданд, гузаронида шуд. Ҷомеаҳои бактериявӣ бо секвениронии ампликонии 16S rRNA V3–V4 ва ҳафт кислотаи равғании занҷири кӯтоҳи наҷосатӣ бо GC–MS таҳқиқ шуданд.

Дар гурӯҳи Blastocystis-мусбат консентратсияҳои кислотаҳои сиркоӣ, пропионӣ, бутирӣ, валерӣ, капронӣ ва изобутирӣ пасттар буданд; барои кислотаи изовалерӣ фарқи назаррас мушоҳида нашуд. Дар таҳлили 16S, дар гурӯҳи мусбат ACE, Chao1, Faith's phylogenetic diversity, шумораи ASV-ҳои мушоҳидашуда ва гуногунии Shannon мувофиқи ҳадди аҳамиятнокии p<0,01, ки дар тадқиқот муайян шудааст, пасттар буданд. Таркиби умумии ҷомеаи бактериявӣ низ байни гурӯҳҳо ҷудо шуд; натиҷаи ANOSIM R=0,9852 ва p=0,003 буд.

Дар сатҳи таксономӣ, дар қутосҳои Blastocystis-мусбат фаровонии нисбии Bacteroidota пасттар ва фаровонии нисбии Firmicutes_D баландтар буд. Баъзе авлодҳои бактериявие, ки қаблан бо ферментатсияи карбогидратҳо ё ташаккули кислотаҳои равғании занҷири кӯтоҳ алоқаманд дониста шудаанд, низ дар гурӯҳи мусбат камтар намояндагӣ мекарданд. Таҳлили PICRUSt2 фарқиятҳоро дар потенсиали функсионалии пешбинишудаи микробии гурӯҳҳо нишон дод; аммо ин натиҷаҳо ченаки воқеии экспрессияи ген, фаъолияти фермент ё ҷараёни метаболикӣ нестанд.

Маҳдудияти асосии тафсири тадқиқот сабабият аст. Азбаски ҳар ду гурӯҳ аз ҳайвоноти исҳолдор иборат буданд, гурӯҳи назорати солим вуҷуд надошт, ҳаҷми намуна танҳо шаш ҳайвон/гурӯҳ буд ва парҳез, синну сол, истифодаи дору ва дигар сироятҳои энтерикӣ ҳамаҷониба назорат нашуданд, хулоса баровардан мумкин нест, ки Blastocystis сабаби тағйироти микробиота, коҳиши SCFA ё исҳол шудааст.

Оё Мусбатии Blastocystis spp. Дар Ин Тадқиқот Ҳамчун Сабаби Исҳол Исбот Шуд?

Не. Тадқиқот танҳо дар байни қутосҳои исҳолдор ҳайвоноти Blastocystis-мусбат ва Blastocystis-манфиро муқоиса кардааст; азбаски гурӯҳи назорати солим ва тарҳи сирояти таҷрибавӣ вуҷуд надошт, нишон додан мумкин нест, ки Blastocystis сабаби исҳол ё тағйироти мушоҳидашудаи микробӣ ва метаболикӣ шудааст. Бозёфтҳо танҳо намунаҳои бо мусбатии Blastocystis алоқамандро нишон медиҳанд.

Аҳамияти микробиотаи рӯда дар қутосҳо

Қутосҳо чорвои кавшакунандаанд, ки ба шароити муҳити Платои Цинхай–Тибет, аз ҷумла гипоксияи музмини гипобарӣ, ҳарорати паст, радиатсияи шадиди ултрабунафш ва маҳдудияти мавсимии хӯрок мутобиқ шудаанд. Барои истифодаи хӯроки платоии бой аз нах, ферментатсияи микробии меъдаю рӯда нақши муҳим дорад.

Микробиотаи рӯда танҳо аз бактерияҳо иборат нест. Археяҳо, занбӯруғҳо, вирусҳо ва эукариотҳои микробӣ низ ҷузъҳои экосистемаи рӯда мебошанд. Бо вуҷуди ин, ин тадқиқот махсусан ба ҷомеаҳои бактериявии наҷосат тамаркуз кардааст ва секвениронии ампликонии 16S rRNA-ро истифода бурдааст; занбӯруғҳо, вирусҳо ё бори мутлақи бактерияҳо чен карда нашудаанд.

Кислотаҳои равғании занҷири кӯтоҳ чистанд?

Кислотаҳои равғании занҷири кӯтоҳ кислотаҳои хурди органикӣ мебошанд, ки метавонанд дар натиҷаи коркарди карбогидратҳои ферментшаванда аз ҷониби микроорганизмҳои рӯда ба вуҷуд оянд. Ацетат, пропионат ва бутират аз ҷумлаи SCFA-ҳое мебошанд, ки дар экосистемаи рӯда бештар омӯхта шудаанд.

SCFA-ҳо бо мубодилаи энергияи ҳуҷайраҳои эпителиалӣ, pH-и люмен, бутунии монеа ва танзими иммунӣ алоқаманданд. Аммо миқдори SCFA, ки дар наҷосат чен мешавад, танҳо нишон намедиҳад, ки бактерияҳо чӣ қадар SCFA истеҳсол кардаанд. Истеҳсол, ҷаббиш дар рӯда, истифода аз ҷониби мизбон, вақти транзит, миқдори оби наҷосат ва субстрати дастрас якҷоя консентратсияи наҷосатро муайян мекунанд.

Чаро Blastocystis танҳо ҳамчун “патоген” тафсир намешавад?

Blastocystis дар бисёр популятсияҳои одамон ва ҳайвонот ошкор мешавад ва муносибати мизбон–микробиота метавонад аз тадқиқот ба тадқиқот фарқ кунад. Дар баъзе тадқиқотҳои инсонӣ мавҷудияти Blastocystis бо гуногунии бештари бактериявӣ алоқаманд дониста шудааст, дар ҳоле ки дар баъзе ҳолатҳои исҳол баъзе зертипҳо бо гуногунии пасттар ва намунаҳои фарқкунандаи микробиота алоқаманд буданд.

Аз ин рӯ, танҳо “Blastocystis-мусбат” будан дар ҳамаи мизбонҳо натиҷаи якхелаи биологиро маъно надорад. Зертип, намуди мизбон, ҳолати клиникӣ, парҳез, микробиотаи заминавӣ ва муҳит метавонанд натиҷаҳоро тағйир диҳанд.

Чаро ин тадқиқот ба қутосҳои платоӣ тамаркуз мекунад?

Гипоксияи музмин, сармо, маҳдудияти мавсимии ғизо ва режими чарониши дорои нахҳои зиёд дар қутосҳои баландкӯҳ метавонад ферментатсияи рӯда ва ҳамкории мизбон–микробро аз ҳайвоноти пасткӯҳ фарқ кунад.

Манбаъ ин заминаи экологиро ҳамчун далели илмӣ истифода мебарад, ки метавонад муносибати Blastocystis–микробиотаро тағйир диҳад. Аммо азбаски дар тадқиқот посухҳои мизбон вобаста ба оксиген, градиенти баландӣ ё нишондиҳандаҳои гипоксия чен нашудаанд, хулосаи “баландкӯҳ таъсири Blastocystis-ро зиёд кард” баровардан мумкин нест.

Саволи тадқиқот

Саволи асосӣ ин аст, ки оё мусбатии табиии Blastocystis дар қутосҳои исҳолдор бо чор хусусияти зерин алоқаманд аст:

• тағйир ёфтани ҷомеаи бактериявии наҷосат,
• коҳиш ёфтани ғановат ва гуногунии бактериявӣ,
• тағйир ёфтани потенсиали пешбинишудаи метаболикии микробӣ,
• паст шудани консентратсияҳои SCFA дар наҷосат.

Чаро набудани гурӯҳи назорати солим муҳим аст?

Гурӯҳи манфӣ аз ҳайвоноти солим иборат нест. Ин қутосҳо низ исҳол доранд. Аз ин рӯ, нуқтаи умумии ҳар ду гурӯҳ исҳол аст; тадқиқот муқоиса мекунад, ки оё ҳолати Blastocystis дар ин заминаи клиникии вайроншуда бо намунаи иловагии микробиота/метаболит алоқаманд аст ё не.

Ин тарҳ метавонад фарқи байни қутоси исҳолдори Blastocystis-манфӣ ва қутоси исҳолдори Blastocystis-мусбатро нишон диҳад; аммо нишон дода наметавонад, ки экосистемаи рӯдаи қутоси солим чӣ гуна аст ё Blastocystis дар гузариш аз ҳолати солим ба исҳол чӣ нақш дорад.

Дигар омилҳои халалрасон

Синну сол, ҷинс, ҳолати бадан, истеъмоли муфассали хӯрок, таърихи эмкунӣ, истифодаи ахири зиддимикробӣ ё зиддипаразитӣ ва шиддати исҳол дар сатҳи инфиродӣ ба таври низомнок дастрас нестанд.

Илова бар ин, сабабҳои алтернативии исҳол, аз ҷумла бактериявӣ, вирусӣ, протозойӣ ва гелминтӣ, ҳамаҷониба тафтиш нашудаанд. Аз ин рӯ, қисми фарқиятҳои мушоҳидашудаи микробиота ва SCFA метавонад бо омилҳои клиникӣ ё экологие, ки ба Blastocystis вобаста нестанд, алоқаманд бошад.

Тасдиқи намуд/зертипи Blastocystis

Қисми тақрибан 600 bp-и small-subunit rRNA бо PCR амплификатсия шудааст. Праймерҳои истифодашуда Bs-RD5-F ва Bs-BhRDr-R буданд. Маҳсулоти PCR бо электрофорези гели агарозӣ санҷида шуда, маҳсулоти муваффақ ба bidirectional Sanger sequencing фиристода шуданд.

Шаш секвенси тасдиқшуда бо референсҳои GenBank PP439446.1 ва OR117711.1 %99,84 монандӣ нишон доданд. Секвенсҳо бо accession рақамҳои PX888047–PX888052 ба GenBank бор карда шуданд.

Ин натиҷа муайянкунии Blastocystis spp.-ро дастгирӣ кард; аммо зертипи муайяни ST-ро боэътимод муайян накард. Аз ин рӯ, натиҷаҳои микробиотаи тадқиқотро ба зертипи мушаххаси Blastocystis нисбат додан мумкин нест.

Дар бораи интиқоли зоонозӣ чӣ гуфтан мумкин аст?

Ин тадқиқот интиқоли зоонозиро намесанҷад. Азбаски аз қутосҳо, одамон, дигар ҳайвонот ва манбаъҳои умумии муҳит ҳамзамон ва бо ҳалли зертипӣ секвенсҳо ҷамъоварӣ нашудаанд, интиқол ба инсон ё аз инсон ба қутосро нишон додан мумкин нест.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Тарҳи намунагирӣ

Нигоҳдории намунаҳои наҷосат

Наҷосати тоза мустақиман аз рӯдаи рост ё фавран пас аз дефекатсия бо маводи стерилии яккарата гирифта шуда, дар рӯи яхи хушк интиқол ва дар лаборатория дар −80 °C нигоҳдорӣ шудааст.

Протоколи Blastocystis PCR

Аз тақрибан 200 mg наҷосат бо истифода аз Omega Fecal DNA Kit DNA-и геномӣ ҷудо карда шуд. Қисми Blastocystis SSU rRNA бо праймерҳои Bs-RD5-F ва Bs-BhRDr-R афзоиш дода шуд.

Дар омехтаи 25 µL PCR аз 12,5 µL 2× Taq PCR Master Mix, 1,0 µL аз ҳар праймер, тақрибан 100 ng template DNA ва nuclease-free water истифода шуд. Даври гармӣ чунин буд: денатуратсияи ибтидоӣ дар 95 °C барои 5 дақиқа, 35 давр бо 95 °C барои 15 сония, 59 °C барои 15 сония ва 72 °C барои 45 сония, сипас final extension дар 72 °C барои 10 дақиқа.

Секвениронии ампликонии 16S rRNA

Барои таҳлили бактериявӣ қисми гипертағйирёбандаи V3–V4-и гени 16S rRNA бо праймерҳои 338F ва 806R афзоиш дода шуд.

Амплификатсия чунин анҷом дода шуд: денатуратсияи ибтидоӣ дар 95 °C барои 3 дақиқа; 30 давр бо 95 °C барои 30 сония, 55 °C барои 30 сония, 72 °C барои 45 сония; ва дар охир 72 °C барои 10 дақиқа.

Дар назоратҳои Extraction blank ва no-template PCR ампликон ошкор нашуд. Китобхонаҳо дар Illumina MiSeq ба таври 2 × 300 bp paired-end секвениронӣ шуданд.

Натиҷаи сифати секвениронӣ

Хатти коркарди биоинформатикӣ

Секвенсҳои demultiplex-шуда бо QIIME 2 v2023.9 коркард шуданд. Пас аз тоза кардани праймерҳо ва базаҳои пастсифат, denoising, пайвастани paired-end, dereplication, error correction ва chimera removal бо DADA2 анҷом дода шуданд.

DADA2 ба ҷойи кластерҳои OTU-и асосёфта ба монандӣ exact amplicon sequence variant эҷод кард. Барои таснифи таксономӣ Genome Taxonomy Database release R214 ва q2-feature-classifier naïve Bayes classifier истифода шуданд; confidence threshold 0,7 буд.

Секвенсҳои хлоропласт, митохондрия ва ғайрибактериявӣ хориҷ карда шуданд; пеш аз таҳлили гуногунӣ намунаҳо то умқи ҳадди ақали секвениронӣ rarefy шуданд.

Таҳлили гуногунии алфа

ACE ва Chao1 баҳодиҳии ғановатро; Faith's phylogenetic diversity гуногунии филогенетикиро; observed ASVs шумораи вариантҳои мушоҳидашударо; Pielou evenness баробарии тақсимоти ҷомеаро; Shannon ва Simpson бошад ғановат ва сохтори тақсимотро бо роҳҳои гуногун инъикос мекунанд.

Аз рӯйи Good's coverage байни гурӯҳҳо фарқ ошкор нашуд. Плато шудани каҷҳои Rarefaction нишон медиҳад, ки дар намунаҳои мавҷуда умқи секвениронӣ барои тавсифи гуногунии бактериявии мушоҳидашуда кофӣ аст; ин маънои кофӣ будани шумораи намунаҳоро надорад.

Гуногунии бета ва ҷудошавии гурӯҳҳо

Гуногунии бета то чӣ андоза фарқ кардани таркиби ҷомеаҳои бактериявии намунаҳоро аз ҳамдигар арзёбӣ мекунад. Дар Bray–Curtis dissimilarity PCoA ва NMDS татбиқ шуданд, инчунин PCA ва UPGMA истифода гардиданд.

Арзиши баланди мусбати R дар ANOSIM нишон медиҳад, ки дар 12 намунаи таҳқиқшуда фарқиятҳои таркибии байни гурӯҳҳо аз фарқиятҳои дохили гурӯҳҳо қавитаранд. Бо сабаби хурд будани намуна, натиҷаро ба популятсияҳои беруна умумӣ кардан лозим нест.

Таркиб дар сатҳи филум

Таносубҳои монанди Firmicutes/Bacteroidota набояд танҳо ҳамчун “нишондиҳандаи универсалии dysbiosis” истифода шаванд. Ба таносубҳои таксономӣ намуди мизбон, парҳез, минтақаи меъдаю рӯда, омодасозии намуна, усули секвениронӣ ва заминаи беморӣ таъсир мерасонанд.

Намунаҳои барҷаста дар сатҳи авлод

Дар гурӯҳи Blastocystis-мусбат, аз ҷумлаи авлодҳои серфаровон Arthrobacter_B (%10,20), Romboutsia_B (%8,94) ва Faecousia (%8,04) буданд. Дар гурӯҳи Blastocystis-манфӣ Faecousia (%16,17), Cryptobacteroides (%8,11) ва Paraprevotella (%3,58) барҷаста буданд.

Таҳлили LEfSe дар гурӯҳи мусбат Firmicutes_D, Actinobacteriota, Bacilli, Micrococcaceae, Planococcaceae, Bacillales_A, Peptostreptococcales ва Arthrobacter_B; дар гурӯҳи манфӣ бошад Bacteroidota, Bacteroidia, Bacteroidales, Oscillospiraceae_88309, Spirochaetota, Verrucomicrobiota, Faecousia ва Alloprevotella-ро ҳамчун таксонҳои фарқкунанда нишон дод.

Ин таксонҳо набояд ҳамчун “биомаркери ташхисии Blastocystis” қабул шаванд. Тасдиқи беруна ва таҳлили иҷрои ташхисӣ гузаронида нашудааст.

Шабакаи ҳамҳузурии микробӣ

Ба таҳлили шабака танҳо авлодҳое ворид шуданд, ки дар ҳадди ақал %50-и намунаҳо мавҷуд буданд ва фаровонии миёнаи нисбии онҳо аз %0,1 зиёд буд. Пайванд танҳо вақте нигоҳ дошта шуд, ки арзиши мутлақи коррелятсияи Spearman ҳадди ақал 0,70 ва q-и бо Benjamini–Hochberg ислоҳшуда <0,05 буд.

Масалан Enterenecus бо Phocaeicola_A_858004, Porcincola, Agathobacter_164119 ва Pygmaiobacter коррелятсияи мусбат нишон дод. Faecousia бо UBA644, UBA5905 ва UBA6857 мусбат; Neoscardovia бошад бо QALR01, UBA1732 ва UBA1259 коррелятсияи манфӣ нишон дод.

Ин шабака намунаи омории ҳамтағйирёбиро нишон медиҳад. Хулоса баровардан мумкин нест, ки як бактерия бактерияи дигарро мустақиман дастгирӣ ё маҳдуд мекунад.

Ченкунии кислотаҳои равғании занҷири кӯтоҳ

Тақрибан 200 mg наҷосати обшуда дар 1,8 mL %0,5 кислотаи фосфор гомогенизатсия шуда, дар 15.000×g барои 10 дақиқа ва 4 °C сентрифуга шуд. Supernatant бо ethyl acetate экстраксия ва аз филтри 0,22 µm PTFE гузаронида шуд.

Ҳамчун стандарти дохилӣ 1 mM кислотаи 4-метилвалерӣ истифода шуд. Силсилаи калибровкаи ҳафтнуқтаӣ омода гардида, барои қабул шарти R² ≥0,99 татбиқ шуд.

Дастгоҳи GC–MS аз газ-хроматографи Agilent 7890B ва Agilent 5977B mass-selective detector иборат аст. Колонкаи HP-FFAP дорои 30 m × 0,25 mm диаметри дохилӣ × 0,25 µm ғафсии плёнка мебошад.

Як µL намуна дар ҳолати splitless бо ҳарорати inlet 250 °C ворид карда шуд, гелий бо ҷараёни доимии 1,0 mL/дақиқа ҳамчун гази интиқолдиҳанда истифода шуд. Барномаи Oven чунин буд: 50 °C барои 1 дақиқа; бо 10 °C/дақиқа то 180 °C; сипас бо 20 °C/дақиқа то 240 °C ва нигоҳдорӣ дар 240 °C барои 5 дақиқа.

Electron ionization дар 70 eV анҷом дода шуда, режими selected-ion-monitoring истифода шуд.

Тасдиқи усули GC–MS

Натиҷаҳои SCFA

Оё Коҳиши SCFA Дар Наҷосат Бевосита Исбот Мекунад, Ки Истеҳсоли Микробии SCFA Кам Шудааст?

Не. Ба консентратсияи SCFA дар наҷосат, илова бар истеҳсоли микробӣ, ҷаббиши рӯда, истифодаи мизбон, транзити меъдаю рӯда, миқдори оби наҷосат ва субстрати дастрас таъсир мерасонанд; аз ин рӯ арзишҳои пасти SCFA дар наҷосат, ки дар ин тадқиқот чен шудаанд, метавонанд бо кам шудани истеҳсоли микробӣ мувофиқ бошанд, аммо ченаки мустақими суръати истеҳсол нестанд.

Тафсири якҷояи SCFA ва таркиби бактериявӣ

Дар гурӯҳи мусбат камтар намояндагӣ кардани Bacteroidota ва баъзе таксонҳо, аз ҷумла Alloprevotella, Faecalibacterium, Caproiciproducens, Intestinimonas, Angelakisella ва Roseburia, ки қаблан бо ферментатсияи карбогидрат ё истеҳсоли SCFA алоқаманд дониста шудаанд, намунае мебошад, ки бо натиҷаҳои SCFA ҳамсамт аст.

Бо вуҷуди ин, функсия метавонад дар сатҳи намуд ва ҳатто штамм фарқ кунад. Маълумоти ампликонии 16S V3–V4 чен намекунад, ки бактерия воқеан кадом метаболитҳоро бо чӣ суръат истеҳсол мекунад.

Оё Натиҷаҳои PICRUSt2 Фаъолияти Воқеии Метаболикиро Чен Мекунанд?

Не. PICRUSt2 усули пешбинӣ мебошад, ки аз профилҳои таксономии 16S rRNA ва маълумоти геномҳои референсӣ истифода бурда, қобилияти эҳтимолии генетикӣ ва метаболикии ҷомеаро ҳисоб мекунад; миқдори воқеии ген, транскрипсия, сафеда, фаъолияти фермент, ҷараёни метаболикӣ ё истеҳсоли SCFA мустақиман чен нашудаанд.

Пешбиниҳои асосёфта ба MetaCyc

Дар гурӯҳи Blastocystis-мусбат баъзе роҳҳои пешбинишудаи марбут ба гликолиз, TCA/глиоксилат bypass ва метаболизми метионин/гомосерин бештар намояндагӣ мекарданд.

Дар гурӯҳи манфӣ роҳҳое ба монанди ASPASN-PWY ва COLANSYN-PWY ва NAGLIPASYN-PWY, ки бо биосинтези пӯшиши ҳуҷайра/гликан алоқаманданд, бештар пешбинӣ шуданд.

Пешбиниҳои асосёфта ба KEGG

Дар гурӯҳи мусбат намояндагии пешбинишудаи роҳҳои марбут ба синтез/таҷзияи ҷисмҳои кетонӣ, метаболизми кислотаҳои равғанӣ, таҷзияи аминокислотаҳои занҷири шохадор, ABC transporters, phosphotransferase system ва tryptophan metabolism баландтар буд.

Дар гурӯҳи манфӣ роҳҳое ба монанди биосинтези аминокислотаҳои занҷири шохадор, folate one-carbon pool, glycosaminoglycan degradation, biotin metabolism ва lipopolysaccharide biosynthesis бештар намояндагӣ мекунанд, гуфта шудааст.

Тасдиқи ин фарқиятҳои функсионалии зоҳирӣ ченкуниҳои мустақими молекулавӣ, аз ҷумла shotgun metagenomics, metatranscriptomics ё metabolomics-ро талаб мекунад.

Таҳлили оморӣ

Омор бо SPSS 27.0 анҷом дода шуд. Ҳар як қутос ҳамчун воҳиди мустақили таҷрибавӣ қабул шуд; агар такрори техникӣ вуҷуд дошт, барои ба даст овардани як арзиш барои ҳар ҳайвон миёна гирифта шуд.

Нормалӣ будан бо Shapiro–Wilk ва якхелагии дисперсия бо санҷиши Levene арзёбӣ шуд. Маълумоти нормалӣ ва дорои дисперсияи баробар бо independent-samples Student's t-test; маълумоти нормалӣ, вале бо дисперсияи нобаробар бо Welch's t-test; маълумоти ғайринормалӣ бо Mann–Whitney U муқоиса шуд.

Ҳадди асосии дуҷонибаи аҳамиятнокӣ p<0,01 буд. Дар муқоисаҳои сершумори таксономӣ ва функсионалии пешбинишуда ислоҳи Benjamini–Hochberg false-discovery-rate истифода шуда, q<0,01 аҳамиятнок ҳисоб шуд. Натиҷаҳое, ки пас аз ислоҳ аҳамиятнокиро нигоҳ надоштанд, иктишофӣ арзёбӣ шуданд.

Барои LEfSe дар санҷишҳои Kruskal–Wallis ва pairwise Wilcoxon меъёрҳои интихобии p<0,05 ва LDA score ≥2,0 истифода шуданд.

Диққат ба тафсири ҳадди p дар манбаъ

Дар abstract-и манбаъ арзишҳои Pielou evenness p=0,011 ва Simpson p=0,037 дар гурӯҳи мусбат пасттар гузориш шудаанд. Аммо дар қисмати усул ҳадди асосии дуҷонибаи аҳамиятнокии омории тадқиқот p<0,01 муқаррар шудааст.

Аз ин рӯ, ин ду метрикаи гуногунии алфа гарчанде аз рӯйи самт пасттаранд, мувофиқи ҳадди асосӣ набояд аз ҷиҳати оморӣ аҳамиятнок ҳисоб шаванд. ACE, Chao1, Faith's PD, observed ASVs ва Shannon шарти p<0,01-ро қонеъ мекунанд.

Роҳи фарзиявии биологие, ки тадқиқот пешниҳод мекунад

Механизме, ки муаллифон муҳокима мекунанд, занҷири сабабии мустақиман тасдиқшуда нест, балки гипотезаест, ки натиҷаҳои мавҷударо ба ҳам мепайвандад:

1. Мусбатии Blastocystis бо сохтори муайяни ҷомеаи бактериявӣ якҷо мушоҳида мешавад.
2. Намояндагии нисбии баъзе таксонҳои бо ташаккули SCFA алоқаманд коҳиш меёбад.
3. Консентратсияи чанд SCFA дар наҷосат пасттар чен мешавад.
4. Фарз мешавад, ки дастрасии пасти SCFA метавонад ба гомеостази эпителиалӣ ва иммунӣ таъсир расонад.

Марҳилаи охирин дар ин тадқиқот мустақиман чен нашудааст. Intestinal permeability, tight-junction proteins, GPR43 expression, cytokines ва histopathology арзёбӣ нашудаанд.

Тафсир аз нуқтаи назари байторӣ

Санҷиши Blastocystis PCR метавонад як қисми таҳқиқоти васеи ташхисии исҳол дар қутосҳо бошад. Аммо натиҷаи мусбати PCR танҳо сабаби исҳолро муайян намекунад ва интихоби табобати мушаххасро тасдиқ намекунад.

Дар арзёбии клиникӣ парҳез, гидрататсия, таърихи дору, шиддати исҳол ва дигар сироятҳои бактериявӣ, вирусӣ, протозойӣ ё гелминтӣ низ бояд баррасӣ шаванд.

Манбаъ қайд мекунад, ки тадбирҳои умумии амнияти биологӣ, аз қабили идоракунии дурусти наҷосат ва муҳофизати хӯрок/об аз олудашавии фекалӣ, метавонанд таъсиррасонии фекалӣ–даҳониро коҳиш диҳанд.

Самаранокии пробиотик, пребиотик, иловаи SCFA ё формулаҳои гиёҳӣ дар бемории қутосии марбут ба Blastocystis бо ин тадқиқот тасдиқ нашудааст; онҳоро набояд ҳамчун табобати исботшуда пешниҳод кард.

Натиҷаҳое, ки тадқиқот дастгирӣ мекунад

Дар наҷосати қутосҳои исҳолдори Blastocystis-мусбат консентратсияи шаш SCFA нисбат ба қутосҳои исҳолдори Blastocystis-манфӣ пасттар аст.

Таркиби ҷомеаи бактериявии гурӯҳҳои қутосҳои исҳолдори мусбат ва манфӣ дар намунаи таҳқиқшуда ба таври равшан ҷудо шудааст.

ACE, Chao1, Faith's PD, observed ASVs ва гуногунии Shannon дар гурӯҳи мусбат дар доираи ҳадди асосии аҳамиятнокии p<0,01 пасттаранд.

Bacteroidota ва баъзе таксонҳои бо ферментатсия/SCFA алоқаманд дар гурӯҳи мусбат фаровонии нисбии пасттар нишон доданд.

PICRUSt2 нишон дод, ки дар потенсиали функсионалии пешбинишудаи гурӯҳҳо фарқиятҳо мавҷуданд.

Натиҷаҳое, ки тадқиқот дастгирӣ намекунад

Нишон дода нашудааст, ки Blastocystis сабаби исҳол мебошад.

Нишон дода нашудааст, ки Blastocystis мустақиман сабаби тағйироти мушоҳидашудаи бактериявӣ мебошад.

Нишон дода нашудааст, ки сатҳҳои пасти SCFA дар наҷосат мустақиман суръати пасттари истеҳсоли микробии SCFA-ро ифода мекунанд.

Профили микробиотаи қутосҳои солимро аз ин тадқиқот баровардан мумкин нест.

Натиҷаҳои PICRUSt2 ченаки воқеии экспрессияи ген ё ҷараёни метаболикӣ нестанд.

Коррелятсияҳои шабакаи co-occurrence ҳамкории мустақими микробӣ нестанд.

Фарқиятҳои таксономӣ ҳамчун биомаркери ташхисӣ тасдиқ нашудаанд.

Дар бораи патогении зертипи муайяни Blastocystis хулоса баровардан мумкин нест.

Интиқоли зоонозии қутос–инсон нишон дода нашудааст.

Нишон дода нашудааст, ки пробиотик, пребиотик, SCFA ё маҳсулоти гиёҳӣ табобати Blastocystis мебошанд.

Маҳдудиятҳои асосӣ

Тадқиқотҳои оянда

Барои тасдиқи натиҷаҳо тадқиқотҳои калонтар, longitudinal ва фарогири чанд хоҷагӣ заруранд. Арзёбии ҳамзамони қутосҳои солим ва исҳолдор метавонад ҳолати референсии норасидаро таъмин кунад.

Маълумоти муфассал дар бораи синну сол, ҷинс, ҳолати бадан, парҳез, таърихи дору ва шиддати клиникӣ бояд ҷамъоварӣ шавад; ҳамсироятҳои бактериявӣ, вирусӣ, протозойӣ ва гелминтӣ ҳамаҷониба тафтиш карда шаванд.

Барои Blastocystis таҳлили subtype-resolved гузаронида шавад; функсияи микробӣ бо shotgun metagenomics, metatranscriptomics ё metabolomics мустақиман санҷида шавад.

Барои арзёбии механизми биологӣ дар сатҳи мизбон натиҷаҳо ба монанди бутунии монеаи рӯда, сафедаҳои tight-junction, ретсепторҳои SCFA, цитокинҳо, гистопатология, ҳазмшавандагӣ ва нишондиҳандаҳои истеҳсол заруранд.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Унвони аслӣ: Blastocystis spp. Positivity Is Associated with Altered Fecal Bacterial Communities and Reduced Short-Chain Fatty Acid Concentrations in Diarrheic Yaks.

Муаллифон: Qiang Zhang; Ziye Zhu; Ziyi Xu; Muhammad Safdar; Wentong Liu; Kun Li.

Corresponding authors: Wentong Liu; Kun Li.

Муассисаҳо: Agriculture, Rural Affairs, Water Resources and Science & Technology Bureau of Lixian County; College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University; School of Basic Medicine, Hubei University of Arts and Science; Department of Breeding & Genetics, Cholistan University of Veterinary and Animal Sciences; Institute of Molecular Biology and Biotechnology, Foundation for Research and Technology-Hellas.

Маҷалла: Veterinary Sciences.

Ношир: MDPI, Basel, Switzerland.

Маълумоти нашр: Veterinary Sciences 2026, 13(9), 910.

DOI: 10.3390/vetsci13090910.

Таърихи мақола: Қабул шуд 13 июли 2026; бознигарӣ шуд 31 августи 2026; пазируфта шуд 1 сентябри 2026; нашр шуд 4 сентябри 2026.

Навъи манбаъ: Мақолаи аслии тадқиқотӣ; омӯзиши ҳайвоноти иктишофӣ, буриши уфуқӣ ва мушоҳидавӣ.

Рецензия: Veterinary Sciences маҷаллаи рецензияшавандаи дастрасии озод аст.

Иҷозатнома: Creative Commons Attribution (CC BY).

Намунаи асосӣ: Намунаҳои наҷосати қутосҳои исҳолдор, ки соли 2025 аз як хоҷагии Лҳаса гирифта шудаанд.

Муқоисаи ниҳоӣ: 6 қутоси исҳолдори Blastocystis-мусбат ва 6 қутоси исҳолдори Blastocystis-манфӣ.

Назорати солим: Нест.

Усули муайянкунии Blastocystis: SSU rRNA PCR + bidirectional Sanger sequencing.

Секвенсҳои Blastocystis: GenBank PX888047–PX888052.

Зертип: Боэътимод таъин нашудааст.

Усули профили бактериявӣ: 16S rRNA V3–V4 amplicon sequencing; Illumina MiSeq 2 × 300 bp.

Биоинформатика: QIIME 2 v2023.9; DADA2; GTDB release R214; q2-feature-classifier.

Секвениронии хом: 2.751.028 read.

Секвениронӣ пас аз сифат: 2.620.949 read; %95,27 retention.

Дастрасӣ ба маълумоти хоми 16S: NCBI Sequence Read Archive BioProject PRJNA1414128.

Гуногунии алфа: ACE, Chao1, Faith's phylogenetic diversity, observed ASVs, Pielou's evenness, Shannon, Simpson ва Good's coverage.

Гуногунии бета: Bray–Curtis; PCA; PCoA; NMDS; UPGMA; ANOSIM 999 permutations.

Таҳлили дифференсиалии таксон: LEfSe; LDA ≥2,0.

Шабакаи co-occurrence: Коррелятсияи Spearman дар сатҳи авлод; мавҷудият дар ≥%50 намуна; average relative abundance >%0,1; |ρ| ≥0,70; BH q<0,05.

Пешбинии функсионалӣ: PICRUSt2; MetaCyc ва KEGG. Ченаки мустақими функсия нест.

Усули SCFA: Gas chromatography–mass spectrometry.

GC–MS: Agilent 7890B + 5977B mass-selective detector; HP-FFAP column.

SCFA-ҳои ченшуда: Acetic, propionic, butyric, isobutyric, valeric, isovaleric ва caproic acids.

Омор: SPSS v27.0; Shapiro–Wilk; Levene; Student's t-test; Welch's t-test; Mann–Whitney U; Benjamini–Hochberg FDR.

Ҳадди асосии аҳамиятнокӣ: Дуҷониба p<0,01; дар муқоисаҳои сершумори таксон/функсия q<0,01. LEfSe дар протоколи интихоби худ p<0,05 истифода кардааст.

Ёддошти гузориши оморӣ: Дар Abstract Pielou's evenness бо p=0,011 ва Simpson бо p=0,037 пасттар гузориш шудаанд; ин ду арзиш ба ҳадди асосии p<0,01, ки дар қисмати усул муайян шудааст, мувофиқ нестанд.

Натиҷаи асосии SCFA: Дар гурӯҳи мусбат кислотаҳои сиркоӣ, пропионӣ, бутирӣ, валерӣ, капронӣ ва изобутирӣ пасттаранд; барои кислотаи изовалерӣ фарқи назаррас нест.

ANOSIM: R=0,9852; p=0,003.

Кумитаи ахлоқ: Ethics Committee of Nanjing Agricultural University; NJAU.No20240910164; санаи тасдиқ 10 сентябри 2024.

Розигии огоҳона: Татбиқ намешавад.

Маблағгузорӣ: Key R&D and Transformation Projects of the Xizang Autonomous Region, XZ202601ZY0138; National Natural Science Foundation of China, 32102692.

Дастрасии маълумот: Маълумоти хоми 16S PRJNA1414128; секвенсҳои Blastocystis SSU rRNA PX888047–PX888052.

Ихтилофи манфиатҳо: Муаллифон ихтилофи манфиатҳоро гузориш надодаанд.

Саҳми муаллифон: Консептуализатсия Kun Li; методология, нармафзор, таҳлили формалӣ, тадқиқот ва куросияи маълумот Qiang Zhang, Ziye Zhu ва Ziyi Xu; валидация Kun Li ва Wentong Liu; захираҳо, визуализатсия, роҳбарӣ, идоракунии лоиҳа ва дарёфти маблағ Kun Li; лоиҳаи аввал Kun Li ва Wentong Liu; бозбинӣ/таҳрир Kun Li ва Muhammad Safdar гузориш шудааст.

Маҳдудияти асосии методологӣ: Бо сабаби тарҳи буриши уфуқии хурд, набудани назорати солим, як хоҷагӣ, metadata-и нопурраи мизбон/парҳез, систематикӣ истисно нашудани дигар патогенҳои энтерикӣ ва муайян нашудани зертипи Blastocystis сабабият муқаррар карда намешавад.

Маҳдудияти тафсири функсионалӣ: Маълумоти фаровонии нисбии 16S шумораи мутлақи бактерияҳоро; PICRUSt2 фаъолияти воқеии ген ё метаболикиро; консентратсияи SCFA дар наҷосат бошад суръати мустақими истеҳсоли микробии рӯдаро чен намекунад.

Маҳдудияти истифодаи байторӣ: Мусбатии Blastocystis PCR танҳо сабаби исҳолро муайян намекунад ва барои табобати мушаххас кофӣ нест.

Ёддошти истифодаи визуалӣ: Манбаъ бо иҷозатномаи CC BY дастрас аст. Дар визуали муқоваи Verianla ба ҷойи нусхабардории айнӣ аз графикҳои манбаъ, нишон додани муносибати қутос, Blastocystis, тағйироти ҷомеаи бактериявӣ ва SCFA-и камшуда ба шакли илмӣ дуруст, мустақил ва схемавӣ афзал дониста мешавад.