Байкалин (baicalin), Scutellaria baicalensis Georgi тамырларында кездешүүчү флавон глюкурониди болуп саналат жана бул изилдөөдө чочколордун репродуктивдик жана респиратордук синдрому вирусуна (porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV) каршы вируска каршы жана оорунун оордугун азайтуучу потенциалы изилденген. Изилдөө алгач баштапкы чочко альвеолярдык макрофагдарында (porcine alveolar macrophages, PAMs) баскычка мүнөздүү in vitro эксперименттерди, андан кийин эксперименттик түрдө PRRSV менен жугузулган 20 торопойдо профилактикалык азыктандыруу экспериментин колдонгон. Байкалин 80 µg/mL чейин PAM жашоого жөндөмдүүлүгүн байкаларлык азайткан эмес жана PRRSV инфекциялык циклинде эң күчтүү аныкталуучу вируска каршы активдүүлүк вирустун клетка бетине жабышуу баскычында байкалган. Жугузулган торопойлордо вирус жүгү жана дем алуу жолдору аркылуу бөлүнүп чыгышы төмөн, ысытма жана клиникалык белгилер жеңилирээк болгон. Бирок байкалин вирус берилгенге чейин эки күн мурда башталып берилгендиктен, изилдөө калыптанып калган PRRSV инфекциясы дарыланганын көрсөтпөйт.

Клетка экспериментинде байкалиндин концентрациясы 20дан 80 µg/mLге жогорулаган сайын инфекциялык вирус титри жана PRRSV nsp9 mRNA деңгээли төмөндөгөн. Attachment баскычындагы концентрация–жооп моделинде EC50 9,021 µg/mL деп эсептелген. Клетканын жашоого жөндөмдүүлүк экспериментинде CC50 197,2 µg/mL болгон.

Баскычка мүнөздүү эксперименттер маанилүү айырмачылыкты көрсөткөн: текшерилген шарттарда байкалин вирусту түздөн-түз инактивациялаган эмес; вирустук кирүү, клетка ичиндеги репликация же progeny вирустун бөлүнүп чыгышына олуттуу таасир көрсөткөн эмес. Таасир эң ачык болгон шарт — байкалин PRRSV PAM бетине байланышып жаткан учурда болушу. Бирок изилдөө байкалин түздөн-түз вирустук кабык белогунабы, клетка бетиндеги attachment факторунабы же эрте инфекциянын башка компонентиниме таасир этерин аныктаган эмес.

Жаныбар экспериментинде PRRSV + байкалин тобунда беш жаныбардын төртөө, ал эми PRRSV гана тобунда беш жаныбардын бирөө эксперименттин аягына жеткен. Бул сандык айырма байкаларлык көрүнгөнү менен Kaplan–Meier салыштыруусу \(p=0{,}082\), Fisher exact тести болсо \(p=0{,}206\) болгондуктан, жашап калуу айырмасы статистикалык жактан маанилүү эмес. Ошондуктан жашап калуу жыйынтыгы алдын ала табылга катары бааланышы керек.

Эмне үчүн PRRSV көзөмөлдөө кыйын болгон чочко патогени?

PRRSV асыл тукум жаныбарларда репродуктивдик жоготууларды, жаш чочколордо дем алуу оорусун жана өсүүнүн артта калышын пайда кылышы; ошондой эле тубаса жана жүрө пайда болгон иммундук жоопторду бузуп, экинчилик инфекцияларга сезгичтикти жогорулатышы мүмкүн болгон маанилүү чочко патогени.

Эмдөө, биокоопсуздук, үйүрдү турукташтыруу жана патогенди мониторингдөө PRRS көзөмөлүнүн негизги компоненттери болуп саналат. Бирок PRRSVнин генетикалык жана антигендик ар түрдүүлүгү ар кандай талаа штаммдарына каршы гетерологиялык вакцина коргоосун чектеши мүмкүн. Изилдөөнүн максаты вакциналардын ордуна жаңы вариант коюу эмес, учурдагы көзөмөл программаларын колдой ала турган кошумча вируска каршы кошулмаларды баалоо болуп саналат.

Байкалин деген эмне?

Байкалин, Scutellaria baicalensis Georgi тамырларынын негизги биоактивдүү компоненттеринин бири болгон флавон глюкурониди. Мурунку эксперименттик изилдөөлөрдө ар кандай вирустук инфекциялар жана сезгенүү моделдеринде вируска каршы, антиоксиданттык жана иммундук жөнгө салуучу активдүүлүктөр билдирилген.

PRRSV боюнча мурунку изилдөөлөр байкалиндин айрым штаммдарга каршы in vitro активдүүлүгүн көрсөткөнү менен, вирустун жашоо циклинин кайсы баскычы негизги бута экени, жугузулган торопойлордогу коргоочу натыйжалуулуктун даражасы жана вируска каршы таасир менен сезгенүү өзгөрүүсүнүн байланышы толук чечилген эмес.

Изилдөөнүн гипотезасы

Авторлор байкалин PRRSVге каршы эки бири-бирин толуктоочу процесс аркылуу коргоо бере алат деп сунушташкан: эрте вирус–клетка өз ара аракеттенүүсүнө кийлигишүү жана андан кийин пайда болгон про-сезгенүү жооптун алсыроосу.

Бул гипотезанын биринчи бөлүгү түздөн-түз баскычка мүнөздүү клетка эксперименттери менен изилденген. Экинчи бөлүгү болсо жаныбарларда IL-1β, IL-6, IL-8 жана TNF-α өлчөөлөрү менен бааланган. Бирок изилдөөнүн ковариациялык анализи сезгенүүдөгү өзгөрүү түздөн-түз байкалинденби же төмөн вирус жүгүнүн экинчилик натыйжасынанбы келип чыкканын ажырата алган эмес.

Байкалин PRRSV инфекциясынын кайсы баскычында эң күчтүү вируска каршы таасир көрсөткөн?

Байкалин текшерилген баскычка мүнөздүү in vitro шарттардын ичинде эң күчтүү аныкталуучу вируска каршы активдүүлүктү PRRSVнин PAM клетка бетине жабышуу баскычында көрсөткөн; вирусту түздөн-түз инактивациялоо, вирустук кирүү, клетка ичиндеги репликация жана progeny вирустун бөлүнүп чыгышы шарттарында болсо маанилүү вируска каршы таасир аныкталган эмес. Бул жыйынтык attachment баскычын көрсөтөт, бирок байкалиндин түз молекулярдык бутасын аныктабайт.

Баскычка мүнөздүү эксперименттин логикасы

Вируска каршы кошулма “вирусту азайтканын” көрсөтүү анын кайсы биологиялык баскычта таасир этерин өзүнчө түшүндүрбөйт. Ошондуктан изилдөөчүлөр PRRSV жашоо циклинин ар кандай баскычтарын өзүнчө эксперименттик түзүлүштөрдө текшеришкен.

Эмне үчүн 4 °C колдонулган?

Attachment экспериментинде төмөн температура вирус клетка бетине байланыша алышына шарт түзүп, энергияга көз каранды клетка ичине кирүү процесстерин олуттуу чектөө үчүн колдонулган. Ошентип байланышуу баскычы менен кийинки internalization процесси эксперименттик түрдө ажыратылган.

Attachment жыйынтыгы бута белокту аныктайбы?

Жок. PRRSVнин алгачкы клетка контакты heparan sulfate жана CD169 сыяктуу ар кандай беттик компоненттер менен байланыштуу болушу мүмкүн; CD163 болсо өндүрүмдүү инфекция үчүн маанилүү болгону менен, көбүнчө internalization, мембрана fusion жана uncoating процесстеринде иштейт.

Байкалин attachment баскычында таасирдүү болгондуктан, ал вирустук кабык белогуна же клетка бетинин компонентине кийлигишиши биологиялык жактан мүмкүн; бирок булакта түз байланышуу, рецепторго көз карандылык же молекулярдык өз ара аракеттенүү эксперименти жасалган эмес. Белгилүү молекулярдык бутаны ыйгаруу учурдагы маалыматтын чегинен чыгат.

Байкалин менен baicalein бир эле молекула эмес

Булак байкалиндин агликон формасы болгон baicalein үчүн адабиятта PRRSVге түз байланышуу жана EGFR/PI3K–AKT менен байланышкан таасирлер билдирилгенин талкуулайт. Бирок глюкуронидация полярдуулукту, мембрана өткөрүмдүүлүгүн жана белокко байланышуу жөндөмүн өзгөрткөндүктөн, baicalein үчүн көрсөтүлгөн механизмди байкалинге түз көчүрүүгө болбойт.

Бул изилдөө байкалин PRRSV дарылоосу экенин көрсөтөбү?

Жок. Жаныбар экспериментинде байкалин PRRSV challengeдан эки күн мурда башталып, инфекция бою жем менен берилген; инфекциядан кийин дарылоо башталган өзүнчө топ болбогондуктан, изилдөө калыптанып калган PRRSV инфекциясы дарыланганын көрсөтпөйт. Булак жаныбардагы табылгаларды профилактикалык азыктык кошумча үчүн proof-of-concept далил катары чектейт.

Профилактика менен терапиянын айырмасы

Профилактикалык дизайнда кошулма патоген менен жолукканга чейин организмде болот. Дарылоо дизайнында болсо кийлигишүү инфекция калыптангандан, вирус аныкталгандан же клиникалык белгилер башталгандан кийин башталат.

Байкалиндин негизги in vitro активдүүлүгү эрте attachment баскычында байкалганы бул айырманы андан да маанилүү кылат. Эгер кошулманын эң күчтүү аныкталуучу таасири вирус–клетка контактынын эрте чекитинде болсо, challengeга чейин кошулманын болушу эксперименттик жактан артыкчылыктуу шарт болуп саналат.

Байкалинди ооз аркылуу колдонуудагы дагы бир чектөө

Булак байкалиндин ооз аркылуу биожеткиликтүүлүгү ичегиде сиңүү, метаболизм жана энтерогепатикалык иштетүү себептүү чектелүү экенин билдирет. Ошондуктан жемдеги номиналдык доза менен бута ткандын активдүү экспозициясы бир эле түшүнүк эмес.

Авторлор келечекте фосфолипиддик комплекстер, нанобөлүкчөлөр же башка жеткирүү системалары сыяктуу формуляция стратегияларын баалоону сунушташат; булар азыркы изилдөөдө текшерилген колдонмолор эмес.

Изилдөөнүн Ыкмасы жана Жыйынтыктары

Клетка жана вирус системасы

Баштапкы porcine alveolar macrophages (PAMs) жана жогорку патогендүү PRRSV-2 штаммы SCSN2020 Chengdu Agricultural College Animal Disease Diagnostic Center тарабынан берилген.

PAMдар PRRSVнин табигый бута клеткаларына биологиялык жактан байланыштуу баштапкы клетка системасын бергендиктен, изилдөөнүн вируска каршы баалоосунда негизги клеткалык модель катары колдонулган.

Клетканын жашоого жөндөмдүүлүк эксперименти

Байкалин DMSOдо эритилип, 0,22 µm фильтрден стерилденген жана культура чөйрөсүндө төмөнкү концентрацияларга суюлтулган:

10, 20, 40, 60, 80, 100, 200, 300, 400 жана 500 µg/mL.

Бардык байкалин уячаларында DMSOнун акыркы концентрациясы %0,1 деңгээлде сакталган. Ар бир шартта сегиз техникалык кайталоо колдонулуп, 48 сааттык инкубациядан кийин CCK-8 менен OD450 өлчөнгөн.

Булакта берилген теңдеме:

\[ \text{Cell viability inhibition rate}(\%)= \left( 1- \frac{OD_{450,\ treatment}-OD_{450,\ blank}} {OD_{450,\ mock}-OD_{450,\ blank}} \right)\times100 \]

түрүндө.

Булак ичиндеги метрикалык эскертүү: ыкма бул туюнтманы “cell viability inhibition rate” деп атаса, 1-сүрөттүн жыйынтыктары клетканын жашоого жөндөмдүүлүгүн Mock пайызы катары көрсөтөт. Эки аталыш булакта бирдей туюнтма менен берилбегендиктен, Verianla бул айырманы жашырбайт.

Клетка токсикалуулугунун жыйынтыгы

10–80 µg/mL диапазонунда 48 сааттын аягында клетканын жашоого жөндөмдүүлүгү %80ден жогору калган. 200 µg/mL жана андан жогорку концентрацияларда жашоо жөндөмдүүлүгү байкаларлык азайган; төрт параметрлүү логистикалык регрессия:

\[ CC_{50}=197{,}2\ \mu g/mL \]

жыйынтыгын берген.

Ошондуктан баскычка мүнөздүү вируска каршы эксперименттерде 80 µg/mL булакта текшерилген цитотоксикалык эмес диапазондун жогорку чектеринин бири катары колдонулган.

RT-qPCR

Клетка, ткань жана сүртүндүлөрдөн жалпы RNA бөлүп алынган; RNA тазалыгы жана концентрациясы ScanDrop спектрофотометри менен өлчөнүп, PrimeScript RT Kit колдонулуп cDNA синтезделген.

PRRSV көчүрмө саны жана PRRSV nsp9 деңгээлдери qPCR менен бааланган. Салыштырмалуу ген экспрессиясы β-actin референс генине карата:

\[ 2^{-\Delta\Delta C_t} \]

ыкмасы менен эсептелген.

Вирус титрлөө

PRRSV үлгүлөрү 10 эселик сериялык суюлтулуп, ар бир суюлтуу сегиз техникалык уячага колдонулган. Цитопатикалык таасир үч күн бою көзөмөлдөнгөн; %50 ткань культурасынын инфекциялык дозасы Reed–Muench ыкмасы менен эсептелип:

log10 TCID50/mL

түрүндө берилген.

Ар бир вирус титрлөө үч көз карандысыз эксперименттен турган жана ар бир суюлтууда сегиз техникалык кайталоо колдонулган. Статистикалык эксперименттик бирдик жеке техникалык уячалар эмес, көз карандысыз эксперименттер болгон.

Attachment концентрация–жооп жыйынтыгы

Attachment экспериментинде байкалин 20, 40 жана 80 µg/mL концентрацияларында вирус титрлерин контролго салыштырмалуу маанилүү азайтып, эң чоң азайуу 80 µg/mLде байкалган.

5, 10, 20, 40, 60 жана 80 µg/mL концентрацияларынан түзүлгөн төрт параметрлүү логистикалык концентрация–жооп моделинде:

\[ EC_{50}=9{,}021\ \mu g/mL \]

эсептелген.

nsp9 mRNA деңгээли да ошол эле attachment шартында концентрация өскөн сайын азайган.

Жаныбар экспериментинин дизайны

Төрт жаныбар тобу

1. Mock: стандарттуу жем, PRRSV жок.
2. Байкалин: 0,1 g/kg байкалиндүү жем, PRRSV жок.
3. PRRSV: стандарттуу жем + PRRSV challenge.
4. PRRSV + байкалин: 0,1 g/kg байкалиндүү жем + PRRSV challenge.

Топтор кайчылаш жугушту болтурбоо үчүн өзүнчө кармалган. RT-qPCR, ELISA, клиникалык баалоо жана гистопатологиялык баалоону жүргүзгөн изилдөөчүлөр тиешелүү өлчөөлөр бүткөнгө чейин топтун бөлүштүрүлүшүн билген эмес.

Кармоо шарттары

Жаныбарлар үч күндүк акклиматизациядан кийин болжол менен 28 ± 1 °C жана %60 ± 5 салыштырмалуу нымдуулук шарттарында кармалган; жемге жана сууга эркин жетүү камсыздалган. Изилдөөгө киргизилгенге чейин бардык жаныбарлар PRRSV антигени жана PRRSVге мүнөздүү антителолор боюнча терс экени тастыкталган.

Үлгү алуу

3, 7, 14, 17 жана 21-күндөрү кан, орофарингеалдык сүртүндү жана мурун сүртүндүсү алынган. Өлүм алдында турган же өлгөн жаныбарлардан; ошондой эле эксперименттин аягында тирүү калгандардан өпкө, боор, бөйрөк, hilar лимфа түйүнү, көк боор жана тиешелүү башка ткандар чогултулган.

Виремия жана вирустук бөлүнүп чыгуу qRT-PCR менен бааланган.

Жашап калуу айырмасы статистикалык жактан маанилүү беле?

Жок. PRRSV + байкалин тобунда 4/5, PRRSV гана тобунда 1/5 жаныбар эксперименттин аягына жеткени менен, Kaplan–Meier log-rank тести \(p=0{,}082\) жана 26-күндөгү жашап калуу үлүштөрүнүн Fisher exact тести \(p=0{,}206\) көрсөткөн; топтун көлөмү кичине болгондуктан, бул жыйынтык так жашап калуу пайдасынын далили эмес, алдын ала сүрөттөөчү табылга.

Клиникалык жүрүш

Mock жана байкалин гана топторунда ректалдык температура эксперимент бою нормалдуу диапазондо калган. PRRSV тобунда температура инфекциядан болжол менен беш күн өткөндө көтөрүлүп, узак убакыт 40 °Cден жогору болгон жана чокусунда 41 °Cден ашкан.

PRRSV + байкалин тобунда да убактылуу ысытма пайда болгон; бирок температуранын көтөрүлүү даражасы төмөн болуп, маанилер жалпысынан 39–40 °C диапазонунда калган.

Дене салмагы жана клиникалык баллдар

Mock жана байкалин гана топтору туруктуу салмак кошкон. PRRSV тобунда салмак кошуу катуу басылып, инфекциянын кеч мезгилинде дене салмагы төмөндөөгө ыктаган.

PRRSV + байкалин тобунда салмак кошуу эрте мезгилде жай болгону менен, орто жана кеч мезгилде кайра көбөйгөн. Клиникалык баллдар да PRRSV гана тобуна салыштырмалуу төмөн болуп, кеч мезгилде баштапкы деңгээлдерге жакындаган.

Виремия

PRRSV гана тобунда сывороткадагы вирус жүгү 3-күнү аныктала баштап, 14–17-күндөрү жогорку деңгээлдерге жеткен жана 21-күнү азайганына карабай жогору бойдон калган.

PRRSV + байкалин тобунда сывороткадагы PRRSV көчүрмөлөрү бардык үлгү алуу мезгилинде төмөн болгон; 7, 14 жана 17-күндөрү күчтүү, 3 жана 21-күндөрү да маанилүү азайуулар билдирилген.

Орофарингеалдык жана мурун аркылуу бөлүнүү

PRRSV тобунда орофарингеалдык вирус жүгү 14-күн чамасында чокусуна жеткен. Байкалин берилген жугузулган жаныбарларда орофарингеалдык PRRSV көчүрмөлөрү төмөн болгон.

Мурун сүртүндүлөрүндө да 3-күндөн башталган, 14-күн чамасында жогорулап, андан кийин төмөндөгөн бөлүнүү үлгүсү байкалган; PRRSV + байкалин тобундагы маанилер PRRSV тобуна караганда төмөн болгон.

Макроскопиялык патология

PRRSV тобундагы өпкөлөрдө кочкул кызыл түстүн өзгөрүшү, ачык конгестия, геморрагия жана консолидация аймактары байкалган. Hilar жана inguinal лимфа түйүндөрүндө да ачык түс өзгөрүүлөрү жана геморрагиялык очоктор байкалган.

PRRSV + байкалин тобунда өпкөнүн конгестиясы, геморрагия жана консолидация жеңилирээк көрүнүп, лобулярдык архитектура жакшыраак сакталган. Ошентсе да айрым фокалдык жабыркоолор жана жеңил конгестия толугу менен жоголгон эмес.

Гистопатология

PRRSV тобунун өпкөлөрүндө интерстициалдык пневмония; альвеолярдык септалардын калыңдашы, альвеолярдык боштуктардын тарылышы, бронх жана кан тамырлардын айланасында сезгенүү клеткаларынын инфильтрациясы жана фокалдык ткань архитектурасынын бузулушу байкалган.

Hilar жана inguinal лимфа түйүндөрүндө лимфоиддук уюшулуунун бузулушу, лимфоциттердин азайышы жана фокалдык клеткалык жабыркоо байкалган.

PRRSV + байкалин тобунда альвеолярдык түзүлүш жакшыраак сакталган; септалдык калыңдоо жана сезгенүү инфильтрациясы жеңилирээк көрүнгөн. Лимфа түйүндөрүндө да ткань уюшулуусу жакшыраак сакталган.

Бирок сандык макроскопиялык жана гистопатологиялык баллдар PRRSV + байкалин тобунда төмөндөө тенденциясын көрсөткөнү менен, PRRSV тобуна салыштырмалуу айырмачылыктар статистикалык маанилүүлүк деңгээлине жеткен эмес.

Гистопатология ыкмасы

Ткандар %4 параформальдегидде фиксацияланып, градацияланган этанол катарынан өткөрүлүп, парафинге салынган жана 4 µm кесиндилер даярдалган. Кесиндилер гематоксилин-эозин (H&E) менен боёлуп, Nikon Eclipse 50i микроскобу менен бааланган.

Сывороткадагы сезгенүү цитокиндери

IL-1β, IL-6, IL-8 жана TNF-α сыворотка концентрациялары ELISA менен өлчөнгөн. PRRSV инфекциясы төрт цитокиндин баарын жогорулаткан.

PRRSV + байкалин тобунда төрт цитокин 7 жана 14-күндөрү PRRSV тобуна салыштырмалуу маанилүү төмөн болгон.

9-сүрөт анализинде топ, убакыт жана топ × убакыт өз ара аракети туруктуу эффекттер катары; жеке торопойду кайталанма өлчөө фактору катары камтыган mixed-effects model колдонулуп, алдын ала аныкталган убакыт чекиттеринин салыштыруулары Šídák түзөтүүсү менен жүргүзүлгөн.

Байкалин сезгенүү цитокиндерин түз басаңдаттыбы?

Бул изилдөө муну аныктай алган жок. PRRSV + байкалин тобунда IL-1β, IL-6, IL-8 жана TNF-α төмөн болгону менен, ошол эле жаныбарларда вирус жүгү да байкаларлык төмөн болгон; вирус жүгү ковариат катары кошулганда түзөтүлгөн топ эффекттери маанилүү бойдон калган эмес жана топтордун вирус жүгү бөлүштүрүүлөрү дал келбегендиктен күчтүү коллинеардуулук пайда болгон. Жыйынтыктар түз иммуномодуляциялык механизм менен төмөн вирус жүгүнө байланышкан экинчилик сезгенүүнүн азайышын ишенимдүү ажырата албайт.

Бул айырма эмне үчүн маанилүү?

Вирус азыраак болсо, жуккан макрофагдар да азыраак болуп, ошентип сезгенүү стимулу төмөн болушу мүмкүн. Бул учурда цитокиндердин төмөндөшү үчүн байкалин сезгенүү сигнал жолуна өз алдынча түз кийлигишиши шарт эмес.

Экинчи жагынан, байкалин ар кандай сезгенүү моделдеринде NF-κB, MAPK, оксидативдик стресс жана инфламмасома сигналы менен байланышкан. Учурдагы изилдөө бул биологиялык мүмкүнчүлүктү жокко чыгарбайт, бирок PRRSV моделинде түз себептик иммуномодуляцияны далилдебейт.

Статистикалык анализ

Анализдер GraphPad Prism 9.5.1 менен жүргүзүлгөн. Жаныбар эксперименттеринде эксперименттик бирдик бир торопой болуп саналат. Клетка эксперименттеринде эксперименттик бирдик техникалык уяча эмес, көз карандысыз эксперимент; техникалык кайталоолор статистикалык анализге чейин көз карандысыз эксперимент ичинде орточолонгон.

Изилдөө колдогон жыйынтыктар

• Байкалин PAMдарда текшерилген цитотоксикалык эмес диапазондо PRRSV инфекциялык титрлерин жана nsp9 mRNA деңгээлдерин концентрацияга жараша азайткан.
• Текшерилген жашоо цикли шарттарынын арасында эң күчтүү аныкталуучу вируска каршы активдүүлүк attachment баскычында байкалган.
• Attachment экспериментиндеги EC50 9,021 µg/mL деп эсептелген.
• Клетканын жашоого жөндөмдүүлүк экспериментиндеги CC50 197,2 µg/mL деп эсептелген.
• Профилактикалык диеталык байкалин алган жугузулган торопойлордо сывороткадагы вирус жүгү жана респиратордук вирустук бөлүнүү төмөн болгон.
• Ысытма, клиникалык баллдар жана салмак жоготуу тенденциясы PRRSV + байкалин тобунда жеңилирээк болгон.
• Өпкө жана лимфа түйүндөрүнүн жабыркашы гистологиялык жактан жеңилирээк көрүнгөн; бирок жалпы жабыркоо баллдарында PRRSV тобуна каршы статистикалык маанилүү айырма көрсөтүлгөн эмес.
• IL-1β, IL-6, IL-8 жана TNF-α 7 жана 14-күндөрү PRRSV + байкалин тобунда төмөн болгон.

Изилдөө колдобогон жыйынтыктар

• Байкалин инфекция калыптангандан кийин натыйжалуу PRRSV дарылоосу экенин көрсөтпөйт.
• Байкалин вакциналардын ордун баса аларын көрсөтпөйт; булак аны потенциалдуу кошумча кийлигишүү катары жайгаштырат.
• Байкалиндин attachment баскычындагы түз молекулярдык бутасын аныктабайт.
• Байкалин вирустук бөлүкчөгөбү же клеткалык attachment факторунабы байланышаарын аныктабайт.
• Байкалин цитокиндерди вирус жүгүнөн көз карандысыз түз механизм аркылуу азайтарын далилдебейт.
• 4/5ке каршы 1/5 жашап калуу айырмасы статистикалык жактан так экенин көрсөтпөйт.
• Бир SCSN2020 штаммындагы жыйынтыктар бардык PRRSV-1 жана PRRSV-2 варианттарына тиешелүү экенин көрсөтпөйт.
• 0,1 g/kg жем дозасы оптималдуу доза экенин көрсөтпөйт.
• Узак мөөнөттүү коммерциялык үйүр коопсуздугун же көрсөткүчтөрүн тастыктабайт.

Негизги чектөөлөр

1. Профилактикалык башталыш: Байкалин challengeдан эки күн мурда берилген.
2. Post-challenge дарылоо тобу жок: Калыптанып калган инфекциядагы терапиялык натыйжалуулук белгисиз.
3. Кичине жаныбар тобу: Ар бир топто болгону беш торопой бар.
4. Бир доза: Жаныбар экспериментинде 0,1 g/kg жем дозасы гана колдонулган.
5. Бир вирустук штамм: SCSN2020 бааланган, генетикалык жактан ар башка PRRSV штаммдары текшерилген эмес.
6. Бир баштапкы клетка системасы: In vitro анализ PAMдар менен жүргүзүлгөн; MARC-145 сыяктуу башка системалар колдонулган эмес.
7. Молекулярдык бута белгисиз: Binding жана receptor-dependency эксперименттери жүргүзүлгөн эмес.
8. Иммундук механизм чектелүү: I типтеги интерферондор, interferon-stimulated genes, NK активдүүлүгү, PRRSVге мүнөздүү T клеткалары жана нейтралдаштыруучу антителолор өлчөнгөн эмес.
9. Ооз аркылуу биожеткиликтүүлүк: Байкалиндин ооз аркылуу сиңиши чектелүү жана формуляция оптималдаштырылган эмес.

Булак ичиндеги отчет эскертүүлөрү

In vitro жыйынтыктардын 3.2 бөлүмүндө клетка культурасына колдонуу үчүн “prophylactic dietary baicalin supplementation” деген сөз айкашы колдонулган; ал эми ыкмалар бөлүмүндө PAMдарга культура чөйрөсүндө байкалин колдонулганы ачык сүрөттөлгөн. Verianla in vitro ыкмасын Methods 2.4кө ылайык берет жана “dietary” сөзүн клетка экспериментинин чыныгы процедурасы катары кайталабайт.

Мындан тышкары, ыкмалар бөлүмүндөгү CCK-8 теңдемеси “cell viability inhibition rate” деп аталса, жыйынтык графиги “cell viability (% of Mock)” көрсөтөт. Verianla булак ичиндеги бул терминологиялык айырманы жаңы формула менен оңдобойт.

Келечектеги изилдөөлөр

Булакка ылайык, келечектеги изилдөөлөр post-challenge дарылоо убакыттарын, доза–жооп байланышын жана терапиялык терезени түз баалашы керек.

Вируска каршы кеңдик HP-PRRSV, NADC30-like, NADC34-like жана генетикалык жактан ар башка PRRSV-1/PRRSV-2 штаммдарында текшерилиши керек.

Байкалин вируска же клеткалык attachment факторлоруна түз байланышаарын аныктоо үчүн сандык binding ыкмалары жана receptor-dependency эксперименттери талап кылынат.

Ооз аркылуу биожеткиликтүүлүктү жогорулатууга багытталган формуляция стратегиялары жана коммерциялык өндүрүш шарттарындагы көз карандысыз тастыктоолор жем кошумчасы катары стандартташтыруудан мурун өзүнчө бааланышы керек.

Булак жана Ыкма Жөнүндө Эскертүү

Түпнуска аталышы: Antiviral Activity of Baicalin Against PRRSV In Vitro and in Infected Piglets

Авторлор: Zhiping Lu; Lei Xu; Dike Jiang; Ruijiao Jiang; Tianxiang Chen; Chunlin Fang; Hongli Jiang; Zili Li

Тең салым: Zhiping Lu жана Lei Xu

Жооптуу автор: Zili Li

Мекеме 1: Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine of Hubei Province, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China

Мекеме 2: College of Animal Science and Veterinary Medicine, Chengdu Agricultural College, Chengdu 611130, China

Журнал: Veterinary Sciences

Басмачы: MDPI

Жарыя түрү: Рецензияланган, ачык жеткиликтүү эксперименттик изилдөө макаласы

Библиографиялык жазуу: Veterinary Sciences, 2026, 13(9), 915

DOI: 10.3390/vetsci13090915

Жөнөтүлгөн: 11 август 2026

Ревизия: 31 август 2026

Кабыл алынган: 2 сентябрь 2026

Жарыяланган: 6 сентябрь 2026

Лицензия: Creative Commons Attribution (CC BY).

Негизги изилдөө түрү: Баштапкы клетка культурасында баскычка мүнөздүү вируска каршы эксперименттер + эксперименттик PRRSV инфекциясы бар торопойлор боюнча изилдөө.

Вирус: Жогорку патогендүү PRRSV-2 SCSN2020.

Клетка системасы: Primer porcine alveolar macrophages (PAMs).

Негизги in vitro ыкмалар: CCK-8 клетканын жашоого жөндөмдүүлүгү; TCID50 вирус титрлөө; qRT-PCR; direct virucidal, attachment, entry, intracellular replication жана progeny-release баскыч тесттери.

Жаныбар үлгүсү: 20 даана 21 күндүк ургаачы Yorkshire торопой; төрт топ, n=5.

Жаныбардагы байкалин дозасы: 0,1 g/kg жем; challengeдан эки күн мурда баштап эксперимент бою.

Challenge: 3 mL SCSN2020, \(10^6\) TCID50/mL, интраназалдык.

Негизги үлгү алуу күндөрү: 3, 7, 14, 17 жана 21.

Гистопатология: %4 параформальдегид фиксациясы; 4 µm парафин кесиндиси; H&E; Nikon Eclipse 50i.

Цитокиндер: Сыворотка IL-1β, IL-6, IL-8 жана TNF-α; ELISA.

Статистикалык программа: GraphPad Prism 9.5.1.

Этика: Chengdu Agricultural College Ethics Committee; протокол 2025030001001; бекитүү күнү 11 март 2025.

Маалымдалган макулдук: Колдонулбайт.

Каржылоо: Tianfu Qingcheng Project (Tianfu Agricultural Master), grant 20221226; Rongcheng Talent Program, grant 20250925.

Маалыматтардын жеткиликтүүлүгү: Түпнуска салымдар макаланын ичинде экени; кошумча суроолор биринчи авторлорго багытталышы мүмкүн экени көрсөтүлгөн.

Кызыкчылыктардын кагылышы: Авторлор кызыкчылыктардын кагылышын билдиришкен эмес.

Авторлордун салымдары: Концептуалдаштыруу Zili Li жана Zhiping Lu; методология Zhiping Lu, Dike Jiang жана Lei Xu; программалык камсыздоо Zhiping Lu жана Lei Xu; текшерүү Ruijiao Jiang, Tianxiang Chen жана Hongli Jiang; формалдуу анализ Zhiping Lu жана Zili Li; изилдөө Zhiping Lu жана Chunlin Fang; ресурстар Zhiping Lu жана Zili Li; маалыматтарды куроо Zhiping Lu жана Dike Jiang; алгачкы долбоор Zhiping Lu, Lei Xu жана Dike Jiang; карап чыгуу/редакциялоо Tianxiang Chen жана Chunlin Fang; визуалдаштыруу Zhiping Lu жана Lei Xu; көзөмөл Zili Li; долбоорду башкаруу Zhiping Lu жана Hongli Jiang; каржылоону алуу Zhiping Lu тарабынан жүргүзүлгөн.

Эң маанилүү интерпретациялык чектөө: Жаныбар экспериментинде байкалин инфекциядан мурда бериле баштагандыктан, табылгалар профилактикалык азыктык кийлигишүү үчүн proof-of-concept мүнөзүндө; калыптанып калган PRRSV инфекциясын дарылоого далил эмес.

Жашап калуу чектөөсү: 4/5ке каршы 1/5 байкалган жашап калуу айырмасы log-rank жана Fisher тесттеринде статистикалык маанилүүлүккө жеткен эмес.

Иммундук механизм чектөөсү: Төмөн цитокин деңгээлдери түз байкалин иммуномодуляциясы менен төмөн вирус жүгүнүн экинчилик таасиринин ортосунда ишенимдүү ажыратылган эмес.

Молекулярдык бута чектөөсү: Attachment баскычы негизги аныкталуучу таасир чекити болуп саналат; бирок түз вирустук же клеткалык бута аныкталган эмес.

Булак ичиндеги терминологиялык эскертүү: In vitro жыйынтыктарда колдонулган “dietary” сөзү клетка культурасы ыкмасынын чыныгы колдонуу формасына туура келбейт; ошондой эле CCK-8 теңдемесинин аталышы менен 1-сүрөттөгү “cell viability” көрсөтүлүшү ар башка терминологияны колдонот.

Визуалды кайра тартуу: PRRSV жашоо цикли жана attachmentка багытталган таасир схемасы, клетка концентрация–жооп логикасы, жаныбар экспериментинин дизайны, виремия/бөлүнүү убакыт катарлары жана клиникалык/патологиялык салыштыруулар Verianla үчүн оригиналдуу түрдө кайра түзүлүшү мүмкүн. Гистопатология сүрөттөрү өзү эксперименттик далил болгондуктан, жасалма H&E/микроскопия түзүүнүн ордуна булак сүрөтүн лицензия менен колдонуу же түшүндүрүүчү схема тандалышы керек.

Verianla Live ылайыктуулугу: Live Process, Live Line, Live Compare жана Live Data үчүн жогорку деңгээлде ылайыктуу. Булактан тышкаркы доза–жооп же дарылоо жыйынтыгын эсептеген колдонуучу башкаруучу симуляция ылайыктуу эмес.