Blastocystis spp. адамдарда жана көптөгөн жаныбарларда ичегиде кездеше ала турган, генетикалык жактан ар түрдүү анаэробдук протист; бул изилдөө табигый шартта Blastocystis-оң болгон ичи өткөн топоздордо заңдагы бактериялык коомчулуктун жана кыска чынжырлуу май кислоталарынын профилинин Blastocystis-терс ичи өткөн топоздордон айырмаланарын же айырмаланбасын изилдеген чалгындоочу, кесилиштик байкоочу изилдөө болуп саналат. Лхасадагы бир фермада алынган 30 ичи өткөн топоздун заң үлгүсү текшерилген; алгачкы молекулалык скринингде 11 үлгү оң деп табылып, алардын алтоосунда секвенстик ырастоо ийгиликтүү жүргүзүлгөн. Салыштырма талдоо алты Blastocystis-оң жана туш келди тандалган алты Blastocystis-терс ичи өткөн топоздо жүргүзүлгөн. Бактериялык коомчулуктар 16S rRNA V3–V4 ампликон секвенирлөө менен, ал эми заңдагы жети кыска чынжырлуу май кислотасы GC–MS менен изилденген.

Blastocystis-оң топто уксус, пропион, май, валериан, капрон жана изомай кислоталарынын концентрациялары төмөн болгон; изовалериан кислотасы боюнча маанилүү айырма байкалган эмес. 16S талдоосунда оң топто ACE, Chao1, Faith's phylogenetic diversity, байкалган ASV саны жана Shannon ар түрдүүлүгү изилдөөдө белгиленген p<0,01 маанилүүлүк чегине ылайык төмөн болгон. Бактериялык коомчулуктун жалпы курамы да топтордун ортосунда айырмаланган; ANOSIM жыйынтыгы R=0,9852 жана p=0,003 болгон.

Таксономиялык деңгээлде Blastocystis-оң топоздордо Bacteroidotaнын салыштырмалуу молчулугу төмөн, Firmicutes_Dнин салыштырмалуу молчулугу жогору болгон. Көмүрсууларды ферментациялоо же кыска чынжырлуу май кислоталарын түзүү менен мурда байланыштырылган айрым бактерия тукумдары да оң топто азыраак өкүлчүлүк кылган. PICRUSt2 талдоосу топтордун болжолдонгон микробдук функционалдык потенциалында айырмачылыктар бар экенин көрсөткөн; бирок бул жыйынтыктар чыныгы ген экспрессиясын, фермент активдүүлүгүн же метаболикалык агымды өлчөө эмес.

Изилдөөнүн негизги чечмелөө чеги — себептүүлүк. Эки топ тең ичи өткөн жаныбарлардан тургандыктан, дени сак контролдук топ болбогондуктан, үлгү көлөмү болгону алты жаныбар/топ болгондуктан жана диета, жаш, дары колдонуу жана башка энтерикалык инфекциялар толук көзөмөлдөнбөгөндүктөн Blastocystis микробиота өзгөрүүлөрүнө, SCFA азайышына же ич өткөккө себеп болду деген жыйынтык чыгарууга болбойт.

Blastocystis spp. Оң Болушу Бул Изилдөөдө Ич Өткөктүн Себеби Катары Далилдендиби?

Жок. Изилдөө ичи өткөн топоздордун ичинде гана Blastocystis-оң жана Blastocystis-терс жаныбарларды салыштырган; дени сак контролдук топ жана эксперименттик жуктуруу дизайны жок болгондуктан Blastocystis ич өткөккө же байкалган микробдук жана метаболикалык өзгөрүүлөргө себеп болгонун көрсөтүүгө болбойт. Табылгалар Blastocystis оңдугу менен байланышкан үлгүлөрдү гана көрсөтөт.

Топоздордогу ичеги микробиотасынын мааниси

Топоздор Цинхай–Тибет платосунун өнөкөт гипобариялык гипоксия, төмөн температура, күчтүү ультрафиолет нурлануу жана мезгилдүү тоют чектелүүсү сыяктуу экологиялык шарттарына ыңгайлашкан күйүш кайтаруучу жаныбарлар. Булага бай плато тоюттарын пайдаланууда ичеги-карын микробдук ферментациясы маанилүү роль ойнойт.

Ичеги микробиотасы бактериялардан гана турбайт. Археялар, козу карындар, вирустар жана микробдук эукариоттор да ичеги экосистемасынын бөлүгү болуп саналат. Ошого карабастан, бул изилдөө өзгөчө заңдагы бактериялык коомчулуктарга багытталып, 16S rRNA ампликон секвенирлөөсү колдонулган; козу карындар, вирустар же бактериялардын абсолюттук жүгү өлчөнгөн эмес.

Кыска чынжырлуу май кислоталары деген эмне?

Кыска чынжырлуу май кислоталары — ичеги микроорганизмдери айрыкча ферментациялануучу көмүрсууларды иштеткенде пайда боло ала турган чакан органикалык кислоталар. Ацетат, пропионат жана бутират ичеги экосистемасында эң көп изилденген SCFAлардын катарына кирет.

SCFAлар эпителий клеткаларынын энергия алмашуусу, люмендик pH, тосмо бүтүндүгү жана иммундук жөнгө салуу менен байланышкан. Бирок заңда өлчөнгөн SCFA көлөмү бактериялар канча SCFA өндүргөнүн гана чагылдырбайт. Өндүрүш, ичегиден сиңүү, организм тарабынан пайдалануу, транзит убактысы, заңдагы суунун көлөмү жана жеткиликтүү субстрат бирге заңдагы концентрацияны аныктайт.

Blastocystis эмне үчүн өз алдынча “патоген” катары чечмеленбейт?

Blastocystis көптөгөн адам жана жаныбар популяцияларында табылышы мүмкүн жана ээ организм–микробиота мамилеси изилдөөдөн изилдөөгө өзгөрүшү мүмкүн. Айрым адам изилдөөлөрүндө Blastocystis болушу бактериялык ар түрдүүлүктүн жогору болушу менен байланышса, айрым ич өткөк учурларында белгилүү субтиптер төмөн ар түрдүүлүк жана башкача микробиота үлгүлөрү менен байланышкан.

Ошондуктан жөн гана “Blastocystis оң” болуу бардык ээлерде бирдей биологиялык натыйжаны билдирбейт. Субтип, ээ организмдин түрү, клиникалык абал, диета, фондук микробиота жана айлана-чөйрө натыйжаларды өзгөртүшү мүмкүн.

Бул изилдөө эмне үчүн плато топоздоруна багытталган?

Бийиктикте жашаган топоздордун өнөкөт гипоксиясы, суук, мезгилдүү азыктануу чектелүүсү жана буласы көп жайыт рациону ичеги ферментациясын жана ээ организм–микроб өз ара аракеттенүүсүн төмөн бийиктиктеги жаныбарлардан айырмалап турушу мүмкүн.

Булак бул экологиялык контекст Blastocystis–микробиота байланышын өзгөртүшү мүмкүн деген илимий негиз катары пайдаланат. Бирок изилдөөдө кычкылтекке байланышкан ээ организм реакциялары, бийиктик градиенти же гипоксия көрсөткүчтөрү өлчөнбөгөндүктөн “бийиктик Blastocystis таасирин күчөттү” деген жыйынтык чыгарууга болбойт.

Изилдөөнүн суроосу

Негизги суроо табигый Blastocystis оңдугу ичи өткөн топоздордо төмөнкү төрт өзгөчөлүк менен байланыштуубу:

• заң бактериялык коомчулугунун өзгөрүшү,
• бактериялык байлыктын жана ар түрдүүлүктүн азайышы,
• болжолдонгон микробдук метаболикалык потенциалдын өзгөрүшү,
• заңдагы SCFA концентрацияларынын төмөндөшү.

Дени сак контролдук топтун жоктугу эмне үчүн маанилүү?

Терс топ дени сак жаныбарлардан турган эмес. Бул топоздор да ичи өткөн. Демек, эки топтун орток белгиси — ич өткөк; изилдөө Blastocystis статусу бул бузулган клиникалык контекстте кошумча микробиота/метаболит үлгүсү менен байланыштуубу дегенди салыштырат.

Бул дизайн Blastocystis-терс ичи өткөн топоз менен Blastocystis-оң ичи өткөн топоздун айырмасын көрсөтүшү мүмкүн; бирок дени сак топоздун ичеги экосистемасы кандай болорун же Blastocystisтин дени сак абалдан ич өткөккө өтүүдөгү ролун көрсөтө албайт.

Башка чаташтыруучу өзгөрмөлөр

Жаш, жыныс, дене кондициясы, кеңири тоют керектөө, эмдөө тарыхы, жакынкы мезгилдеги антимикробдук же антипаразиттик колдонуу жана ич өткөктүн оордугу жеке деңгээлде системалуу түрдө жеткиликтүү эмес.

Мындан тышкары бактериялык, вирустук, протозойдук жана гельминттик башка ич өткөк себептери комплекстүү текшерилген эмес. Ошондуктан байкалган микробиота жана SCFA айырмачылыктарынын бир бөлүгү Blastocystisтен башка клиникалык же экологиялык өзгөрмөлөргө байланыштуу болушу мүмкүн.

Blastocystis түрүн/субтибин ырастоо

Болжол менен 600 bp өлчөмүндөгү small-subunit rRNA аймагы PCR менен амплификацияланган. Колдонулган праймерлер Bs-RD5-F жана Bs-BhRDr-R. PCR продукттары агароздук гель электрофорези менен текшерилип, ийгиликтүү продукттар bidirectional Sanger секвенирлөөсүнө жөнөтүлгөн.

Алты ырасталган секвенс GenBank PP439446.1 жана OR117711.1 референстери менен %99,84 окшоштук көрсөткөн. Секвенстер PX888047–PX888052 accession номерлери менен GenBankка жүктөлгөн.

Бул жыйынтык Blastocystis spp. аныктоону колдогон; бирок белгилүү ST субтибин ишенимдүү аныктаган эмес. Ошондуктан изилдөөнүн микробиота жыйынтыктарын белгилүү бир Blastocystis субтибине таандык кылууга болбойт.

Зооноздук жугуу жөнүндө эмне айтууга болот?

Бул изилдөө зооноздук жугушту текшербейт. Топоздордон, адамдардан, башка жаныбарлардан жана жалпы экологиялык булактардан бир убакта жана субтип деңгээлинде секвенстер чогултулбагандыктан адамга же адамдан топозго жугуу көрсөтүлө албайт.

Изилдөөнүн Ыкмасы жана Жыйынтыктары

Үлгү алуу дизайны

Заң үлгүлөрүн сактоо

Жаңы заң түздөн-түз ректумдан же дефекациядан дароо кийин стерилдүү бир жолку материал менен алынган, кургак музда ташылып, лабораторияда −80 °Cде сакталган.

Blastocystis PCR протоколу

Болжол менен 200 mg заңдан Omega Fecal DNA Kit колдонулуп геномдук DNA алынган. Blastocystis SSU rRNA аймагы Bs-RD5-F жана Bs-BhRDr-R праймерлери менен көбөйтүлгөн.

25 µL PCR аралашмасында 12,5 µL 2× Taq PCR Master Mix, ар бир праймерден 1,0 µL, болжол менен 100 ng template DNA жана nuclease-free water колдонулган. Термоцикл; 95 °Cде 5 мүнөт баштапкы денатурация, 35 цикл бою 95 °Cде 15 секунд, 59 °Cде 15 секунд жана 72 °Cде 45 секунд, андан кийин 72 °Cде 10 мүнөт final extension түрүндө жүргүзүлгөн.

16S rRNA ампликон секвенирлөө

Бактериялык талдоо үчүн 16S rRNA генинин V3–V4 гиперөзгөрмө аймагы 338F жана 806R праймерлери менен көбөйтүлгөн.

Амплификация 95 °Cде 3 мүнөт баштапкы денатурация; 30 цикл бою 95 °Cде 30 секунд, 55 °Cде 30 секунд, 72 °Cде 45 секунд; акырында 72 °Cде 10 мүнөт түрүндө жүргүзүлгөн.

Extraction blank жана no-template PCR контролдорунда ампликон аныкталган эмес. Китепканалар Illumina MiSeq платформасында 2 × 300 bp paired-end форматында секвенирленген.

Секвенирлөөнүн сапат жыйынтыгы

Биоинформатикалык иштетүү түтүгү

Demultiplex жасалган секвенстер QIIME 2 v2023.9 менен иштетилген. Праймерлер жана сапаты төмөн базалар алынып салынгандан кийин denoising, paired-end бириктирүү, dereplication, error correction жана chimera removal DADA2 менен жүргүзүлгөн.

DADA2 окшоштукка негизделген OTU кластерлеринин ордуна exact amplicon sequence variant түзгөн. Таксономиялык классификацияда Genome Taxonomy Database release R214 жана q2-feature-classifier naïve Bayes classifier колдонулган; confidence threshold 0,7 болгон.

Хлоропласт, митохондрия жана бактерия эмес секвенстер чыгарылып, ар түрдүүлүк талдоосуна чейин үлгүлөр минималдуу секвенирлөө тереңдигине rarefy кылынган.

Альфа ар түрдүүлүк талдоосу

ACE жана Chao1 байлык баалоолорун; Faith's phylogenetic diversity филогенетикалык ар түрдүүлүктү; observed ASVs байкалган варианттардын санын; Pielou evenness коомчулуктун тең бөлүштүрүлүшүн; Shannon жана Simpson болсо байлык менен бөлүштүрүү түзүлүшүн ар башка жол менен чагылдырат.

Good's coverage боюнча топтор ортосунда айырма аныкталган эмес. Rarefaction ийри сызыктарынын платого чыгышы ушул үлгүлөрдө секвенирлөө тереңдиги байкалган бактериялык ар түрдүүлүктү мүнөздөөгө жетиштүү экенин көрсөтөт; бул үлгү саны жетиштүү дегенди билдирбейт.

Бета ар түрдүүлүк жана топтордун бөлүнүшү

Бета ар түрдүүлүк үлгүлөрдүн бактериялык коомчулук курамдарынын бири-биринен канчалык айырмаланарын баалайт. Bray–Curtis dissimilarity негизинде PCoA жана NMDS колдонулуп, ошондой эле PCA жана UPGMA пайдаланылган.

ANOSIMдеги жогорку оң R мааниси каралган 12 үлгүдө топтор аралык курам айырмачылыктары топ ичиндеги айырмачылыктардан күчтүүрөөк экенин көрсөтөт. Үлгү аз болгондуктан жыйынтык башка популяцияларга жалпыланбашы керек.

Филум деңгээлиндеги курам

Firmicutes/Bacteroidota сыяктуу катыштар өз алдынча универсалдуу “dysbiosis көрсөткүчү” катары колдонулбашы керек. Таксономиялык катыштар ээ организмдин түрүнө, диетага, ичеги-карын бөлүгүнө, үлгү даярдоого, секвенирлөө ыкмасына жана оору контекстине жараша өзгөрөт.

Тукум деңгээлиндеги негизги үлгүлөр

Blastocystis-оң топто эң көп кездешкен тукумдардын арасында Arthrobacter_B (%10,20), Romboutsia_B (%8,94) жана Faecousia (%8,04) болгон. Blastocystis-терс топто Faecousia (%16,17), Cryptobacteroides (%8,11) жана Paraprevotella (%3,58) өзгөчөлөнгөн.

LEfSe талдоосу оң топто Firmicutes_D, Actinobacteriota, Bacilli, Micrococcaceae, Planococcaceae, Bacillales_A, Peptostreptococcales жана Arthrobacter_B; терс топто болсо Bacteroidota, Bacteroidia, Bacteroidales, Oscillospiraceae_88309, Spirochaetota, Verrucomicrobiota, Faecousia жана Alloprevotella сыяктуу таксондорду айырмалоочу катары көрсөткөн.

Бул таксондор “Blastocystis диагностикалык биомаркери” катары кабыл алынбашы керек. Сырткы валидация жана диагностикалык көрсөткүч талдоосу жүргүзүлгөн эмес.

Микробдук бирге кездешүү тармагы

Тармактык талдоого үлгүлөрдүн кеминде %50 бөлүгүндө кездешкен жана орточо салыштырмалуу молчулугу %0,1 көрсөткүчүнөн жогору тукумдар гана киргизилген. Spearman корреляциясынын абсолюттук мааниси кеминде 0,70 жана Benjamini–Hochberg боюнча оңдолгон q мааниси <0,05 болгондо байланыш сакталган.

Мисалы Enterenecus; Phocaeicola_A_858004, Porcincola, Agathobacter_164119 жана Pygmaiobacter менен оң корреляция көрсөткөн. Faecousia UBA644, UBA5905 жана UBA6857 менен оң; Neoscardovia болсо QALR01, UBA1732 жана UBA1259 менен терс корреляция көрсөткөн.

Бул тармак статистикалык бирге өзгөрүү үлгүсүн гана көрсөтөт. Бир бактерия экинчисин түздөн-түз колдойт же басат деген жыйынтык чыгарууга болбойт.

Кыска чынжырлуу май кислоталарын өлчөө

Болжол менен 200 mg эритилген заң 1,8 mL %0,5 фосфор кислотасында гомогенделип; 15.000×gде 10 мүнөт, 4 °Cде центрифугаланган. Supernatant ethyl acetate менен экстракцияланып, 0,22 µm PTFE фильтринен өткөрүлгөн.

Ички стандарт катары 1 mM 4-метилвалериан кислотасы колдонулган. Жети чекиттүү калибрлөө сериясы даярдалып, кабыл алуу үчүн R² ≥0,99 шарты колдонулган.

GC–MS аппараты Agilent 7890B газ хроматографы жана Agilent 5977B mass-selective detector айкалышынан турат. HP-FFAP колонкасы 30 m × 0,25 mm ички диаметри × 0,25 µm пленка калыңдыгына ээ.

Бир µL үлгү splitless режиминде 250 °C inlet температурасында сайылып, гелий 1,0 mL/мүнөт туруктуу агымда ташуучу газ катары колдонулган. Oven программасы 50 °Cде 1 мүнөт; 10 °C/мүнөт менен 180 °Cге; андан соң 20 °C/мүнөт менен 240 °Cге көтөрүү жана 240 °Cде 5 мүнөт кармоо түрүндө болгон.

Electron ionization 70 eVде жүргүзүлүп, selected-ion-monitoring режими колдонулган.

GC–MS ыкмасын валидациялоо

SCFA жыйынтыктары

Заңдагы SCFA Азайышы Микробдук SCFA Өндүрүшүнүн Азайганын Түздөн-түз Далилдейби?

Жок. Заңдагы SCFA концентрациясына микробдук өндүрүштөн тышкары ичегиден сиңүү, ээ организмдин пайдаланылышы, ичеги-карын транзити, заңдагы суунун көлөмү жана жеткиликтүү субстрат таасир этет; ошондуктан бул изилдөөдө өлчөнгөн төмөн заң SCFA көрсөткүчтөрү микробдук өндүрүштүн азайышына шайкеш келиши мүмкүн, бирок өндүрүш ылдамдыгын түздөн-түз өлчөө эмес.

SCFA менен бактериялык курамды бирге чечмелөө

Оң топто Bacteroidota жана Alloprevotella, Faecalibacterium, Caproiciproducens, Intestinimonas, Angelakisella жана Roseburia сыяктуу көмүрсууларды ферментациялоо же SCFA өндүрүү менен мурда байланыштырылган айрым таксондордун азыраак өкүлчүлүк кылышы SCFA жыйынтыктары менен бир багыттагы үлгү болуп саналат.

Ошол эле учурда функция түргө, ал тургай штамм деңгээлине жараша өзгөрүшү мүмкүн. 16S V3–V4 ампликон маалыматы бактерия чындап кайсы метаболиттерди кандай ылдамдыкта өндүрөрүн өлчөбөйт.

PICRUSt2 Жыйынтыктары Чыныгы Метаболикалык Активдүүлүктү Өлчөйбү?

Жок. PICRUSt2 16S rRNA таксономиялык профилдерин жана референстик геном маалыматын колдонуп коомчулуктун мүмкүн болгон генетикалык жана метаболикалык функционалдык мүмкүнчүлүгүн эсептеген божомол ыкмасы; чыныгы ген көлөмү, транскрипция, белок, фермент активдүүлүгү, метаболикалык агым же SCFA өндүрүшү түздөн-түз өлчөнгөн эмес.

MetaCyc негизиндеги божомолдор

Blastocystis-оң топто гликолиз, TCA/глиоксилат bypass жана метионин/гомосерин метаболизми менен байланышкан айрым болжолдуу жолдор жогору өкүлчүлүк кылганы маалымдалган.

Терс топто ASPASN-PWY жана клетка кабыгы/гликан биосинтези менен байланышкан COLANSYN-PWY жана NAGLIPASYN-PWY сыяктуу жолдор көбүрөөк божомолдонгон.

KEGG негизиндеги божомолдор

Оң топто кетон денелеринин синтези/ажыроосу, май кислоталарынын метаболизми, тармакталган чынжырлуу аминокислоталардын ажыроосу, ABC transporters, phosphotransferase system жана tryptophan metabolism менен байланышкан жолдордун болжолдуу өкүлчүлүгү жогору болгон.

Терс топто тармакталган чынжырлуу аминокислоталардын биосинтези, folate one-carbon pool, glycosaminoglycan degradation, biotin metabolism жана lipopolysaccharide biosynthesis сыяктуу жолдор көбүрөөк өкүлчүлүк кылат деп божомолдонгон.

Бул көрүнгөн функционалдык айырмачылыктарды ырастоо үчүн shotgun metagenomics, metatranscriptomics же metabolomics сыяктуу түз молекулалык өлчөөлөр талап кылынат.

Статистикалык талдоо

Статистика SPSS 27.0 менен жүргүзүлгөн. Ар бир топоз өз алдынча эксперименттик бирдик деп кабыл алынган; техникалык кайталоо болсо жаныбарга бир маанини алуу үчүн орточосу эсептелген.

Нормалдуулук Shapiro–Wilk, дисперсиянын бирдейлиги Levene тесттери менен бааланган. Нормалдуу жана дисперсиясы тең маалыматтар independent-samples Student's t-test; нормалдуу, бирок дисперсиясы тең эмес маалыматтар Welch's t-test; нормалдуу бөлүштүрүлбөгөн маалыматтар Mann–Whitney U менен салыштырылган.

Негизги эки тараптуу маанилүүлүк чеги p<0,01. Көптөгөн таксономиялык жана болжолдуу функционалдык салыштырууларда Benjamini–Hochberg false-discovery-rate түзөтүүсү колдонулуп, q<0,01 маанилүү деп эсептелген. Түзөтүүдөн кийин маанилүүлүгүн сактабаган жыйынтыктар чалгындоочу деп бааланган.

LEfSe үчүн өзүнчө Kruskal–Wallis жана pairwise Wilcoxon тесттеринде p<0,05 жана LDA score ≥2,0 тандоо критерийи колдонулган.

Булактагы p-чегин чечмелөөгө көңүл буруу

Булактын abstract бөлүгүндө Pielou evenness p=0,011 жана Simpson p=0,037 маанилери оң топто төмөн деп берилген. Бирок ыкма бөлүгүндө изилдөөнүн негизги эки тараптуу статистикалык маанилүүлүк чеги p<0,01 деп белгиленген.

Ошондуктан бул эки альфа ар түрдүүлүк метрикасы багыты боюнча төмөн болгону менен негизги чектин негизинде статистикалык маанилүү деп эсептелбеши керек. ACE, Chao1, Faith's PD, observed ASVs жана Shannon болсо p<0,01 шартын аткарат.

Изилдөө сунуштаган гипотетикалык биологиялык жол

Авторлор талкуулаган механизм түздөн-түз далилденген себептик чынжыр эмес, учурдагы жыйынтыктарды бириктирген гипотеза:

1. Blastocystis оңдугу белгилүү бактериялык коомчулук түзүлүшү менен бирге байкалат.
2. SCFA түзүлүшү менен байланыштырылган айрым таксондордун салыштырмалуу өкүлчүлүгү азаят.
3. Заңда бир нече SCFAнын концентрациясы төмөн өлчөнөт.
4. SCFA жеткиликтүүлүгүнүн төмөн болушу эпителий жана иммундук гомеостазга таасир этиши мүмкүн деп болжолдонот.

Акыркы баскыч бул изилдөөдө түздөн-түз өлчөнгөн эмес. Intestinal permeability, tight-junction proteins, GPR43 expression, cytokines жана histopathology бааланган эмес.

Ветеринардык көз караштан чечмелөө

Blastocystis PCR тести топоздордогу ич өткөктүн кеңири диагностикалык иликтөөсүнүн бир бөлүгү болушу мүмкүн. Бирок оң PCR жыйынтыгы жалгыз өзү ич өткөктүн себебин аныктабайт жана белгилүү дарылоону тандоону ырастабайт.

Клиникалык баалоодо диета, гидратация, дары тарыхы, ич өткөктүн оордугу жана бактериялык, вирустук, протозойдук же гельминттик башка инфекциялар да эске алынышы керек.

Булак ылайыктуу заң башкаруу жана тоют/сууну фекалдык булгануудан коргоо сыяктуу жалпы биокоопсуздук чаралары фекалдык–оралдык экспозицияны азайтышы мүмкүн экенин белгилейт.

Пробиотик, пребиотик, SCFA кошумчасы же өсүмдүк формулаларынын Blastocystis менен байланышкан топоз оорусундагы натыйжалуулугу бул изилдөө менен ырасталган эмес; алар далилденген дарылоо катары сунушталбашы керек.

Изилдөө колдогон жыйынтыктар

Blastocystis-оң ичи өткөн топоздордун заңында алты SCFAнын концентрациясы Blastocystis-терс ичи өткөн топоздордон төмөн.

Оң жана терс ичи өткөн топоздордун бактериялык коомчулук курамдары каралган үлгүдө ачык айырмаланган.

ACE, Chao1, Faith's PD, observed ASVs жана Shannon ар түрдүүлүгү изилдөөнүн p<0,01 негизги маанилүүлүк чегинде оң топто төмөн.

Bacteroidota жана ферментация/SCFA менен байланышкан айрым таксондор оң топто төмөн салыштырмалуу молчулук көрсөткөн.

PICRUSt2 топтордун болжолдуу функционалдык потенциалында айырмачылыктар бар экенин көрсөткөн.

Изилдөө колдобогон жыйынтыктар

Blastocystis ич өткөккө себеп болгону көрсөтүлгөн эмес.

Blastocystis байкалган бактериялык өзгөрүүлөргө түздөн-түз себеп болгону көрсөтүлгөн эмес.

Төмөн заң SCFA деңгээлдери түздөн-түз төмөн микробдук SCFA өндүрүш ылдамдыгын билдирери көрсөтүлгөн эмес.

Дени сак топоздордун микробиота профили бул изилдөөдөн чыгарылбайт.

PICRUSt2 жыйынтыктары чыныгы ген экспрессиясы же метаболикалык агым өлчөөсү эмес.

Co-occurrence тармагындагы корреляциялар түз микробдук өз ара аракеттенүү эмес.

Таксономиялык айырмачылыктар диагностикалык биомаркер катары ырасталган эмес.

Белгилүү Blastocystis субтибине тиешелүү патогендик касиет чыгарылбайт.

Топоз–адам зооноздук жугушу көрсөтүлгөн эмес.

Пробиотик, пребиотик, SCFA же өсүмдүк продуктулары Blastocystis дарылоосу экени көрсөтүлгөн эмес.

Негизги чектөөлөр

Келечектеги изилдөөлөр

Жыйынтыктарды ырастоо үчүн чоңураак, longitudinal жана бир нече ферманы камтыган изилдөөлөр талап кылынат. Дени сак жана ичи өткөн топоздорду бирге баалоо жетишпеген референстик абалды камсыздай алат.

Жаш, жыныс, дене кондициясы, диета, дары тарыхы жана клиникалык оордук боюнча кеңири маалымат чогултулуп; бактериялык, вирустук, протозойдук жана гельминттик кош инфекциялар толук текшерилиши керек.

Blastocystis үчүн subtype-resolved талдоо жүргүзүлүп; микробдук функция shotgun metagenomics, metatranscriptomics же metabolomics менен түздөн-түз текшерилиши керек.

Ээ организм деңгээлиндеги биологиялык механизмди баалоо үчүн intestinal barrier integrity, tight-junction белоктору, SCFA рецепторлору, цитокиндер, гистопатология, сиңимдүүлүк жана өндүрүш көрсөткүчтөрү сыяктуу жыйынтыктар керек.

Булак жана Ыкма Жөнүндө Эскертүү

Түпнуска аталышы: Blastocystis spp. Positivity Is Associated with Altered Fecal Bacterial Communities and Reduced Short-Chain Fatty Acid Concentrations in Diarrheic Yaks.

Авторлор: Qiang Zhang; Ziye Zhu; Ziyi Xu; Muhammad Safdar; Wentong Liu; Kun Li.

Corresponding authors: Wentong Liu; Kun Li.

Мекемелер: Agriculture, Rural Affairs, Water Resources and Science & Technology Bureau of Lixian County; College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University; School of Basic Medicine, Hubei University of Arts and Science; Department of Breeding & Genetics, Cholistan University of Veterinary and Animal Sciences; Institute of Molecular Biology and Biotechnology, Foundation for Research and Technology-Hellas.

Журнал: Veterinary Sciences.

Басма: MDPI, Basel, Switzerland.

Жарыялоо маалыматы: Veterinary Sciences 2026, 13(9), 910.

DOI: 10.3390/vetsci13090910.

Макаланын тарыхы: Алынган 13-июль 2026; кайра каралган 31-август 2026; кабыл алынган 1-сентябрь 2026; жарыяланган 4-сентябрь 2026.

Булактын түрү: Оригиналдуу изилдөө макаласы; чалгындоочу, кесилиштик жана байкоочу жаныбар изилдөөсү.

Рецензиялоо: Veterinary Sciences рецензиялануучу ачык жеткиликтүү журнал.

Лицензия: Creative Commons Attribution (CC BY).

Негизги үлгү: Лхасадагы бир фермадан 2025-жылы алынган ичи өткөн топоздордун заң үлгүлөрү.

Акыркы салыштыруу: 6 Blastocystis-оң жана 6 Blastocystis-терс ичи өткөн топоз.

Дени сак контрол: Жок.

Blastocystis аныктоо ыкмасы: SSU rRNA PCR + bidirectional Sanger sequencing.

Blastocystis секвенстери: GenBank PX888047–PX888052.

Субтип: Ишенимдүү түрдө дайындалган эмес.

Бактериялык профиль ыкмасы: 16S rRNA V3–V4 amplicon sequencing; Illumina MiSeq 2 × 300 bp.

Биоинформатика: QIIME 2 v2023.9; DADA2; GTDB release R214; q2-feature-classifier.

Чийки секвенирлөө: 2.751.028 read.

Сапаттан кийинки секвенирлөө: 2.620.949 read; %95,27 retention.

Чийки 16S маалыматтарына жеткиликтүүлүк: NCBI Sequence Read Archive BioProject PRJNA1414128.

Альфа ар түрдүүлүк: ACE, Chao1, Faith's phylogenetic diversity, observed ASVs, Pielou's evenness, Shannon, Simpson жана Good's coverage.

Бета ар түрдүүлүк: Bray–Curtis; PCA; PCoA; NMDS; UPGMA; ANOSIM 999 permutations.

Дифференциалдык таксон талдоосу: LEfSe; LDA ≥2,0.

Co-occurrence тармагы: Тукум деңгээлиндеги Spearman корреляциясы; ≥%50 үлгүдө кездешүү; орточо relative abundance >%0,1; |ρ| ≥0,70; BH q<0,05.

Функционалдык божомол: PICRUSt2; MetaCyc жана KEGG. Функцияны түз өлчөө эмес.

SCFA ыкмасы: Gas chromatography–mass spectrometry.

GC–MS: Agilent 7890B + 5977B mass-selective detector; HP-FFAP column.

Өлчөнгөн SCFAлар: Acetic, propionic, butyric, isobutyric, valeric, isovaleric жана caproic acids.

Статистика: SPSS v27.0; Shapiro–Wilk; Levene; Student's t-test; Welch's t-test; Mann–Whitney U; Benjamini–Hochberg FDR.

Негизги маанилүүлүк чеги: Эки тараптуу p<0,01; көптөгөн таксон/функция салыштырууларында q<0,01. LEfSe өз тандоо протоколунда p<0,05 колдонгон.

Статистикалык отчет эскертүүсү: Abstract бөлүгүндө Pielou's evenness p=0,011 жана Simpson p=0,037 менен төмөн деп берилген; бул эки маани ыкма бөлүмүндө көрсөтүлгөн p<0,01 негизги маанилүүлүк чегине туура келбейт.

Негизги SCFA жыйынтыгы: Оң топто уксус, пропион, май, валериан, капрон жана изомай кислоталары төмөн; изовалериан кислотасында маанилүү айырма жок.

ANOSIM: R=0,9852; p=0,003.

Этика комитети: Ethics Committee of Nanjing Agricultural University; NJAU.No20240910164; бекитүү күнү 10-сентябрь 2024.

Маалыматтандырылган макулдук: Колдонулбайт.

Каржылоо: Key R&D and Transformation Projects of the Xizang Autonomous Region, XZ202601ZY0138; National Natural Science Foundation of China, 32102692.

Маалыматтардын жеткиликтүүлүгү: 16S чийки маалыматтары PRJNA1414128; Blastocystis SSU rRNA секвенстери PX888047–PX888052.

Кызыкчылыктардын кагылышы: Авторлор кызыкчылыктардын кагылышын билдиришкен эмес.

Автордук салымдар: Концептуалдаштыруу Kun Li; методология, программалык камсыздоо, формалдык талдоо, изилдөө жана маалыматтарды курациялоо Qiang Zhang, Ziye Zhu жана Ziyi Xu; валидация Kun Li жана Wentong Liu; ресурстар, визуалдаштыруу, жетекчилик, долбоор башкаруу жана каржылоо алуу Kun Li; алгачкы долбоор Kun Li жана Wentong Liu; карап чыгуу/редакциялоо Kun Li жана Muhammad Safdar деп көрсөтүлгөн.

Негизги методологиялык чектөө: Кичине үлгүлүү кесилиштик дизайн, дени сак контролдун жоктугу, бир ферма, толук эмес ээ организм/диета metadataсы, башка энтерикалык патогендердин системалуу түрдө четтетилбегени жана Blastocystis субтибинин аныкталбаганы себептүүлүктү түзүүгө жол бербейт.

Функционалдык чечмелөө чеги: 16S салыштырмалуу молчулук маалыматы бактериялардын абсолюттук санын; PICRUSt2 чыныгы ген же метаболикалык активдүүлүктү; заңдагы SCFA концентрациясы болсо ичеги микробдук өндүрүш ылдамдыгын түздөн-түз өлчөбөйт.

Ветеринардык колдонуу чеги: Blastocystis PCR оңдугу ич өткөктүн себебин өз алдынча аныктабайт жана спецификалык дарылоо үчүн жетишсиз.

Визуалдык колдонуу эскертүүсү: Булак CC BY лицензиясында. Verianla мукаба визуалында булак графиктерин так кайталоонун ордуна топоз, Blastocystis, бактериялык коомчулук өзгөрүүсү жана төмөндөгөн SCFA байланышын илимий жактан туура, көз карандысыз жана схемалык түрдө көрсөтүү артыкчылыктуу.